[发明专利]一种抗尼帕病毒包膜糖蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗尼帕病毒包膜糖蛋白的单克隆抗体14F8，所述抗体具有独特的CDR区，其与尼帕病毒包膜糖蛋白的结合效价为0.47ng/mL，显示了优异的抗原结合活性，可以用于尼帕病毒包膜糖蛋白的检测，且能有效区分尼帕病毒和亨德拉病毒的包膜糖蛋白。本发明还公开了14F8单抗在制备尼帕病毒病治疗药物中的应用，所述抗体能有效抑制尼帕病毒包膜糖蛋白与其细胞受体EFNB2的结合，IC₅₀值为50ng/mL，且中和活性随着抗体浓度增加而增强，当抗体浓度超过1μg/ml时，其抑制率趋于达到100％，显示了14F8单抗作为尼帕病毒病的候选治疗性抗体的前景。

技术领域

本发明公开了一种抗体，属于多肽技术领域。

背景技术

尼帕病毒(Nipah virus，NiV)是一种近年来在南亚地区新出现的高致病性新发传染病病原体，它与雪松病毒(Cedar virus，CedPV)、亨德拉病毒(Hendra virus，HeV)同属于亨尼帕病毒属(genus Henipavirus)副粘病毒科(family Paramyxoviridae)。2015-2018年，世界卫生组织连续四年将其与埃博拉病毒、马尔堡病毒等病原体共同列为当今最有可能引发严重疫情且难以应对的烈性病原体。尼帕病毒病传染性强，死亡率高，自然宿主分布广泛，严重影响全球公共卫生，威胁人类生命健康。

1998年，马来西亚和新加坡的养猪户中发生一种新型传染病，表现为脑炎和呼吸系统症状。并在病人的脑脊液中首次分离到一种新型病毒，其可以与亨德拉病毒抗体发生交叉反应，在对其基因组进行分析后确认这是一种新型亨尼帕病毒属病毒，由于病毒分离自马来西亚霹雳州(state of perak)的尼帕镇(town of Nipah)，故将这种病毒命名为尼帕病毒。马来西亚的尼帕病毒病爆发中，首先在猪中发生轻度呼吸道炎症和脑炎，人接触病猪的感染性分泌物后感染尼帕病毒，随后发病。马来西亚和新加坡疫情爆发中有276例确诊病例和105例死亡病例，病死率为38％。

在首次爆发之后，马来西亚和新加坡没有新增疫情。自2001年以来，印度和孟加拉国发生了多起疫情爆发，孟加拉国的疫情比马来西亚的疫情更分散，病例数更少，导致病死率升高(平均75％)，孟加拉和印度的爆发中，病人临床表现与马来西亚疫情相似，但导致更多的严重呼吸系统疾病。2001年到2017年，共有超过300例确诊病例，最近的一次爆发在2015年，导致9人死亡。由于疫情发生地比较贫困，没有完善的公共卫生体系，实际病例数可能更多。现有研究表明，孟加拉国爆发疫情的主要原因是患者食用了被蝙蝠污染的椰枣树汁，此外还出现了人传人的病例，人与人之间传播的机制尚不清楚，但可能主要是通过与病人体液及分泌物接触感染病毒。2018年5月，印度南部喀拉拉邦爆发尼帕病毒疫情，导致至少17人死亡，尼帕病毒的防控再次引发广泛关注与重视。

尼帕病毒是一种有包膜的单股负链RNA病毒，包膜糖蛋白GP在其感染中发挥重要作用。尼帕病毒侵染细胞时，GP首先与细胞膜上的肝配蛋白受体结合，随后引发融合蛋白(Fusion protein，FP)的构象变化形成刺突，介导病毒包膜与细胞膜的融合，导致病毒核衣壳递送到细胞质中。因此阻断GP与细胞受体的结合是尼帕病毒疫苗及抗体药物的主要保护机制。GP与宿主细胞膜蛋白Ephrin-B2和Ephrin-B3结合，Ephrin-B2和Ephrin-B3分子属于与Eph结合的表面糖蛋白配体家族，并且在已知的敏感宿主中具有高度的序列保守性，氨基酸同源性95％至98％。Ephrin-B2表达在多个器官和组织中的动脉、小动脉和毛细血管中。在病毒附着于含有Ephrin受体的宿主细胞后，F蛋白发生构象变化，从而驱动病毒粒子和宿主细胞之间的膜融合过程，导致将病毒核衣壳递送到细胞质中。

当前有多种尼帕病毒候选疫苗在研发中，包括使用亨德拉病毒GP制备的重组亚单位疫苗、携带NIV-GP基因的重组病毒载体疫苗等。使用噬菌体表面展示文库技术筛选得到的M102.4单克隆抗体对尼帕病毒表现出了良好的中和活性，有望成为候选治疗性抗体。目前尚未有疫苗或抗体药物进入临床试验阶段。