[发明专利]一种多极磁场连续磁珠细胞分离装置及其方法

说明书

本发明提供一种多极磁场连续磁珠细胞分离装置及其方法，包括细胞分离管道，所述细胞分离管道内设有中心隔离杆，所述细胞分离管道与中心隔离杆之间形成流通缓冲液和样品液的腔室，所述腔室内通过隔离层隔离成缓冲液流通腔室和样品液流通腔室，所述隔离层上设有连通缓冲液流通腔室和样品液流通腔室的互通通道，所述互通通道下沿为一圈斜面，所述细胞分离管道外壁对应互通通道的位置设有多个用于牵引抗体磁珠的磁性牵引机构，本发明通过隔离层和多极磁场装置，实现阳性磁珠细胞团从样品液到缓冲液的连续分离。

技术领域

本发明涉及一种细胞分离系统，特别涉及一种多极磁场连续磁珠胰岛细胞团分离装置及其方法。

背景技术

免疫磁珠细胞分选(Magnetic Activated Cell Sorting，MACS)技术是20世纪80年代出现的细胞分离方法，目前已经广泛运用于分离基因、靶细胞及造血干细胞等。常规MACS技术采用磁性标记的细胞通过一个强而稳定磁场中的分选柱，实现细胞的阳性或阴性分选。MACS技术是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。MACS技术已成为许多细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了一种可在每一个实验室进行高品质细胞分选的方法。

德国美天旎生物技术有限公司(Miltenyi Biotec GmbH)在该领域拥有较多专利产品，其开发了一系列细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2(CD303)、BDCA-4(CD304)单抗为其专利产品。美天旎公司的MACS技术主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。MACS分选柱置于一个永久性磁场--MACS分选器中，可以将磁力增强1000倍，足以滞留仅标记极少量微珠的目的细胞。用缓冲液冲洗分选柱，所有未标记的细胞被冲洗掉。分选柱离开磁场，即可获得被标记的细胞组分。所有的操作在2.5－30分钟内即可完成，得到的细胞可立即用于后继实验。

MACS技术优点：

1、稳定、高质量的分选。使用MACS技术，可获得高纯度(90-99％)、高回收率的分选细胞群。

2、对细胞无损伤。50nm微珠和MACS分选柱均无毒性，对细胞无损伤，可以纯化有活力和功能活性的细胞而不影响其活性。

3、操作简便、快速。MACS技术操作简单，消毒方便。磁珠孵育时间很短，仅需15分钟。手动分选可在30分钟内完成，自动MACS分选可在2.5-10分钟之内完成。

4、从实验室到临床。MACS技术可以实现从10⁵到10¹¹个细胞分选。如果使用频率高，可选用自动MACS；密闭系统内无菌分选细胞，可选用临床级别MACS。

5、分选后细胞适用于后续实验。流式细胞术、显微镜分析和分子生物学研究显示MACS分选对细胞没有任何影响。分选后细胞适用于细胞培养和体内实验。此外，分选得到的标记和未标记细胞组分均可回收利用。

6、从细胞到分子分选。MACS技术不仅可以分选各种细胞，还可以分选转染细胞、亚细胞物质、蛋白质、DNA、RNA及mRNA。

但该技术在细胞团的连续分离上效果还不理想，尤其是人和大动物胰岛细胞团的分离。因为人胰腺组织在消化后，组织中有很多胰管、血管等组织，还有包被和未包被的胰岛组织之分，组织块大小不均匀，细胞消化后释放的核酸链也会导致外分泌腺组织和胰岛组织的粘连等。因此常规MACS分选柱容易被大量的胰腺消化后组织堵塞，导致分离系统失效。

发明内容

针对现有的技术不足，本发明提供一种多极磁场连续磁珠细胞分离装置及其方法。