[发明专利]活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用

说明书

本发明涉及活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用，该活化部分凝血活酶时间测定试剂包括：激活剂、磷脂、缓冲剂和保护剂，其中，所述激活剂为鞣花酸。该试剂不仅对肝素的敏感性好，而且检测结果稳定可靠，可有效用于临床上肝素抗凝治疗的监测，应用前景十分广阔。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体地，本发明涉及活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用，更具体地，本发明涉及活化部分凝血活酶时间测定试剂、活化部分凝血活酶时间测定试剂盒以及测定活化部分凝血活酶时间的方法。

背景技术

凝血的过程是血液由液体转变为凝胶状态，其本质为可溶性的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白。活化部分凝血活酶时间(APTT)是检查机体内源性系统凝血功能有无障碍性的过筛实验，是反映凝血因子XII、XI、IX、VIII、X、V、II和I的活性指标。APTT检测原理是：将活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂与待测定的枸橼酸抗凝血浆充分混匀，37℃孵育240s，加入氯化钙溶液，从开始加入钙离子开始计时，到纤维蛋白凝块形成的时间，即为APTT。待测血浆与活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂混匀孵育一定时间的目的是让激活剂充分激活FXII、FXI，这里的激活剂起到“活化”的作用，相当于血管损伤时内皮下胶原暴露，FXII与之接触而被激活。肝素具有抗凝效果佳、价格低廉以及相对安全等优势，已被应用于临床达60多年。目前，活化部分凝血活酶时间(APTT)测定被广泛作为临床上肝素抗凝治疗监测的重要手段，市场上也已有种类众多的APTT测定试剂。

然而，性质更优的APTT测定试剂还需进一步研究开发。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

通常认为肝素治疗时，APTT应控制在正常值的1.5～2.5倍，但发明人却发现，1.5～2.5倍的APTT水平与血栓发生与否的关系并不显著，主要原因是，不同的APTT试剂对肝素的敏感性以及稳定性差异非常之大。比较市面常见的活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒发现，APTT试剂中含有的激活剂主要有鞣花酸和白陶土或硅藻土。以鞣花酸为激活剂的APTT试剂均一性、稳定性较好，但对肝素敏感性欠佳；以白陶土或硅藻土为激活剂的APTT试剂对肝素敏感性较好，但试剂放置时间较长时易产生沉淀，试剂稳定性较差。因此，既对肝素足够敏感，又具有优良的均一性和稳定性的APTT试剂急需开发。基于上述问题，发明人经过大量的实验研究，开发了一种新的活化部分凝血活酶时间测定试剂，该试剂不仅对肝素的敏感性好，而且检测结果稳定可靠，可有效用于临床上肝素抗凝治疗的监测，应用前景十分广阔。

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种活化部分凝血活酶时间测定试剂。根据本发明的实施例，所述活化部分凝血活酶时间测定试剂包括：激活剂、磷脂、缓冲剂和保护剂，其中，所述激活剂为鞣花酸。所述激活剂鞣花酸激活待测血浆中的凝血因子Ⅻ，以部分凝血活酶(磷脂)替代PF3，加入Ca²⁺后血浆凝固，从而测定APTT。发明人发现，所述活化部分凝血活酶时间测定试剂作为一个整体，各组分之间紧密关联，不可分割，进而，根据本发明实施例的活化部分凝血活酶时间测定试剂不仅对肝素的敏感性好，而且检测结果稳定可靠，可有效用于临床上肝素抗凝治疗的监测。

根据本发明的实施例，上述活化部分凝血活酶时间测定试剂还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述磷脂为兔脑磷脂。发明人发现，所述磷脂为兔脑磷脂时，所述活化部分凝血活酶时间测定试剂对肝素的敏感性更好，检测结果更加准确可靠。

根据本发明的实施例，所述保护剂包括选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白的至少之一。

根据本发明的实施例，所述缓冲剂包括缓冲液，所述缓冲液包括选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸、MOPS缓冲液的至少之一。根据本发明的实施例，所述缓冲液的pH为8.0～9.5，如为8.2、8.4、8.6、8.8、9.0、9.2或9.4。