[发明专利]磁珠法FFPE组织中DNA提取方法在审
申请号: | 201910367598.0 | 申请日: | 2019-05-05 |
公开(公告)号: | CN109957563A | 公开(公告)日: | 2019-07-02 |
发明(设计)人: | 高伙妮;金安娜;龚伟;卞珍;张志帅;包文静 | 申请(专利权)人: | 上海睿璟生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 201100 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 磁珠法 脱蜡液 磁珠 医药技术领域 低盐缓冲液 特异性结合 操作安全 乙醇漂洗 杂质去除 混合液 洗脱 蛋白质 样本 消化 | ||
1.一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法,其特征在于:使用试剂盒提取DNA的实验流程如下:
1)取样:每个样本选取1~3张未染色5-10μm厚FFPE切片,置于干净的纸巾上,另取干净1.5mL离心管,并标记好样本名或编号;
2)先用移液器取200μL脱蜡液加入到离心管中,将刮取组织的刀片在离心管中浸湿;
3)用刀片从切片上刮下石蜡包埋的组织,转移至离心管中,再取200μL脱蜡液冲洗刀片上残留组织样本至离心管中,涡旋混匀20s;
4)短暂离心,置于恒温混匀仪上56℃孵育5min,再涡旋混匀20s;
5)短暂离心,加入20μL蛋白酶K,盖好管盖上下颠倒混匀,加入200μL裂解消化液,涡旋混匀10s;
6)短暂离心,置于恒温混匀仪上56℃,800rpm振荡孵育2小时,再90℃孵育60min;
7)从冰箱取出磁珠室温平衡30min;
8)孵育完的组织短暂离心,取下层消化液转移至新的1.5mL离心管,并标记好样本名或编号;
9)消化液中加入300μL结合液和20μL磁珠至样本中,涡旋混匀20s,短暂离心,室温孵育5min,期间颠倒混匀数次;
10)将样本转移至磁力架上吸附2min,吸弃上清液;
11)加入500μL漂洗液1,涡旋混匀15s重悬磁珠,将样本转移至磁力架上吸附2min,吸弃上清液;
12)加入500μL漂洗液2,涡旋混匀15s重悬磁珠,将样本转移至磁力架上吸附2min,吸弃上清液;
13)重复步骤12一次;
14)短暂离心,将样本管转移至磁力架上吸附1min,吸弃所有残余液;
15)打开管盖,室温干燥5~10min;
16)加入50μL洗脱液,提前55℃预热,涡旋打散磁珠;55℃,1500rpm振荡孵育10min;
17)将样本管转移至磁力架上吸附2min,把上清转移至新的1.5mL离心管中,-80℃保存。
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