[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒高免血清的制备方法

说明书

一种猪伪狂犬病毒高免血清的制备方法，它是以猪为免疫对象，使用灭活疫苗进行一次基础免疫和两次加强免疫，再用猪伪狂犬病病毒进行一次攻毒后，采集血清，即得；所述灭活疫苗含有干扰素α、干扰素β、黄芪多糖和巨噬细胞集落刺激因子的免疫增强剂。本发明能克服猪来源的高免血清抗体中和能力差的问题，并能广泛运用于伪狂犬病病毒的JS‑2012株、Bartha‑k61株、HB‑98株、HB2000和/或JS‑A1株，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种猪伪狂犬病病毒高免血清的制备方法。

背景技术

高免血清，是利用某种疫(菌)苗按一定程序反复免疫某种动物，并经抗体检测其滴度达到一定水平后，屠宰被免疫动物并收集全血后，经特殊处理而制成的一种生物制品。高免血清主要用于生物制品的外源病毒检验。

猪伪狂犬病病毒高免血清主要用于兽用生物制品的外源病毒检验。随着猪伪狂犬活疫苗制造工艺的提升，各生产厂家成品疫苗的病毒效价由原来10^5.0TCID₅₀/头份提升到10^6.0TCID₅₀/头份以上，因此，需要制备中和效价更高的猪伪狂犬病病毒血清。

目前，大部分猪伪狂犬高免血清采用兔、羊等异源动物，但存在兔体的采集血量较少，羊外源病毒检测手段困乏、不够准确说明检测结果是否正确等因素的影响。而现有的猪来源的伪狂犬高免血清中和抗体的能力普遍偏弱，无法适用于现今高效价成品疫苗的检测。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了1.一种猪伪狂犬病毒高免血清的制备方法，其特征在于：它是以猪为免疫对象，使用灭活疫苗进行一次基础免疫和两次加强免疫，再用猪伪狂犬病病毒进行一次攻毒后，采集血清，即得；

所述疫苗含有免疫增强剂；

所述免疫增强剂是由0.9％氯化钠缓冲液中加入干扰素α、干扰素β、黄芪多糖和巨噬细胞集落刺激因子配制成水相后，与吐温-60混合乳化制得；所述水相和吐温-60的体积比是(8～10)∶1；

每毫升所述水相含有0.1～100mg干扰素α、0.1～100mg干扰素β、0.1～200mg黄芪多糖和0.1～100mg巨噬细胞集落刺激因子。

如前述的方法，所述水相中含有50mg/ml干扰素α、50mg/ml干扰素β、200mg/ml黄芪多糖和10mg/ml巨噬细胞集落刺激因子。

如前述的方法，所述水相和吐温-60的体积比是9∶1。

如前述的方法，所述灭活疫苗是使用1体积份的免疫增强剂、49体积份灭活病毒和50体积份弗氏佐剂乳化混合而成。

如前述的方法，所述弗氏佐剂在基础免疫时为弗氏完全佐剂，加强免疫时为弗氏不完全佐剂。

如前述的方法，所述猪伪狂犬病病毒为该病毒的JS-2012株、Bartha-k61株、HB-98株、HB2000和/或JS-A1株。

如前述的方法，所述方法还包括血清纯化步骤。

如前述的方法，所述血清纯化步骤为：

(1)0.45微米滤器过滤澄清，收集样品约95ml；

(2)准备纯化用缓冲液：缓冲液A、B和C；

(3)用缓冲液A平衡柱体至基线；

(4)上样，缓冲液A再平衡至基线；

(5)用缓冲液B洗脱至基线，每5ml收集样本1次，直到洗脱至基线。收集后的样品中加入1/10体积缓冲液C进行中和。