[发明专利]一种检测硝基呋喃的免疫胶体检测卡的制备

说明书

本发明硝基呋喃的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含硝基呋喃单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有硝基呋喃蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测硝基呋喃，方便、快捷、结果准确。

技术领域

本发明涉及畜禽、水产中兽药残留检测技术领域，特别是涉及硝基呋喃的免疫胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用，曾经被广泛应用为禽类、水产等的促生长添加剂。但因此药物可以使实验动物发生癌变和基因突变，导致此药物禁止在治疗和饲料中使用。

目前有关动物源性食品中硝基呋喃及其代谢物的测定方法主要为理化检测法，如用化学分析法测定虾肉中 的硝基呋喃残留量，检出限为0.0125ug/kg，用高效液相色谱法测定鱼肉中的硝基呋喃残留量，检出限为0.0125ug/kg。但这些方法仪器设备昂贵，操作复杂，灵敏度低，且不适 用于大批量样品的检测，无法满足国内食品安全检测市场的迫切需要。

免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性，以及测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点，在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化，免疫学检测技术会成为食品农兽药残留和食品安全质量控制的有效快速检测手段。基于目前兽药残留诊断试剂的研究现状，及时开发出优于目前的、快速灵敏的检测试剂可谓是当务之急。虽然农兽药残留分析的方法虽然有很多，但是利用免疫学技术进行分析是特异性最好、检测时间最短的方法。

现有技术对于硝基呋喃的检测主要是气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。

发明内容

针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种硝基呋喃的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出硝基呋喃的问题。

本发明的硝基呋喃胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了硝基呋喃-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。

本发明的硝基呋喃胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：

(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的硝基呋喃抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22µm滤膜；