[发明专利]同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用

说明书

本发明公开了同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用。其包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设置质控线和检测线，所述检测线位于质控线的下方，个数为三条，呈间隔分布，所述三条检测线上分别包被各毒素蛋白偶联物，所述质控线上包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生。其可用于黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸的同步检测，操作简单快速、灵敏度高。

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用。

背景技术

黄曲霉菌一种常见的腐生型好氧真菌，在土壤中以分生孢子或菌核的形式存在，在植物组织中则以菌丝体的形式存在，菌核能在极端环境条件下(高温、干旱等)存活。黄曲霉菌具有多个次级代谢基因簇，可产生黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸等有毒次级代谢产物，能于作物收获前、收获后诱发多种重要农产品，如大米、玉米、花生、饲料等病害的发生并造成黄曲霉菌真菌毒素的污染。黄曲霉毒素是Ⅰ类致癌物质，具有诱导突变、抑制免疫和致癌的作用，能强烈破坏人和动物的肝脏组织，严重时会导致肝癌甚至死亡；杂色曲霉毒素是黄曲霉毒素生物合成的前体物，其毒性仅次于黄曲霉毒素,具有肝毒性,肾毒性,细胞遗传毒性和强致癌性；环匹阿尼酸可单独产生或与黄曲霉毒素同时产生，可导致心细胞变性，胞膜通透性增加，神经元坏死等症状。鉴于黄曲霉菌真菌毒素的危害，世界各国对其含量制定了各种法律法规。为了加强对农产品中黄曲霉菌真菌毒素的检测，保障人们的消费安全，开发针对这些真菌毒素的检测技术，尤其是快速检测，是了解和掌握农产品安全卫生信息，增强食品安全消费的重要环节。

现有技术中常用的黄曲霉菌真菌毒素检测技术主要有薄层层析法、精密仪器分析法、免疫学分析法。薄层层析法不需要特殊的仪器设备，但检测试剂用量大、操作繁琐、准确性差，不能准确定量。精密仪器分析法包括高效液相色谱法、液相色谱与质谱及串联质谱联用等方法，需要严格的实验室环境以及昂贵的仪器设备，具有前处理复杂，样品检测成本高、不适于现场检测。免疫学分析法克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点。其中基于纳米金的免疫层析快速检测技术具有简便、快速、灵敏、适于现场检测的优点。但目前还没有针对黄曲霉菌杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸等多种黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析试纸条问世。因此，迫切需要能同步检测多种真菌毒素的检测技术，以实现对农产品中黄曲霉菌真菌毒素混合污染的同步、快速监测。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用。其可用于样品中黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸三种真菌毒素含量的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：

同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析纸条，包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设置质控线和检测线，所述检测线位于质控线的下方，个数为三条，呈间隔分布，所述三条检测线上分别包被有杂色曲霉毒素-牛血清白蛋白偶联物(ST-BSA)、环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物(CPA-OVA)和黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物(AFB1-BSA)，所述质控线上包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫上横向喷涂有纳米金标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、纳米金标记的抗杂色曲霉毒素单克隆抗体和纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体；所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生。