[发明专利]净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱

权利要求书

1.黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂，其特征在于：所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:3所示，轻链可变区序列如SEQID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂，其特征在于：所述的抗黄曲霉毒素单克隆抗体为抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO.C201013 的杂交瘤细胞株1C11 分泌产生；所述的抗赭曲霉毒素A 单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201329 的杂交瘤细胞株1H2 分泌产生；所述的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201328 的杂交瘤细胞株2D3 分泌产生。

3.装载有权利要求1所述的黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱。

4.权利要求3所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

a) 固相载体基质处理

将CNBr活化的琼脂糖凝胶基质粉末在pH2-3的条件下用HCl洗涤除杂；

b) 配体偶联

使用偶联缓冲液溶解待偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，获得各抗体溶液，迅速将步骤a)处理后的琼脂糖凝胶基质转移到所述抗体溶液中，进行偶联；

c) 配体封闭

封闭所有残留的活性基团；

d) 除去偶联后未偶联上的多余的配体；

e) 装柱。

5.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：所述步骤a）中洗涤用HCl浓度为1mmol/L，洗涤时间为15min；步骤b）中的偶联缓冲液为0.2mol/L NaHCO₃，pH8.3。

6.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：步骤b）中每个抗体溶液浓度为10-15mg/mL；偶联条件为：室温条件20-25℃下充分混匀2-4h。

7.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：步骤c）的配体封闭过程为：转移经步骤b) 处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/LTris-HCl缓冲液中，室温条件下静置2-4h。

8.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：步骤d）为：依次用pH值为4和pH值为8的缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；pH值为4和pH值为8的缓冲液分别选自0.1mol/L 醋酸/ 醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris-HCl缓冲液。

9.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：步骤d）处理后，用5倍琼脂糖凝胶体积的0.01%NaN₃-PBS洗涤，并使用0.01%NaN₃-PBS保存，然后装柱。

10.基于权利要求3所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱检测黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量的方法，其特征在于：将含有黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的样品通过复合亲和柱时，免疫吸附剂会特异性的吸附黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的杂质则流出复合亲和柱，然后用色谱级甲醇洗脱亲和柱，收集洗脱液即净化浓缩后的样品供高效液相色谱-质谱联用仪检测，分析样品中各毒素含量。