[发明专利]Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、组合物及试剂盒

说明书

Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、组合物及试剂盒；Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，特别是涉及一种Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物及包括该组合物的试剂盒。

背景技术

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是分子生物学中一种核酸扩增的重要技术手段，已广泛用于临床的疾病诊断和预防中。PCR检测结果的准确性和准确度主要由扩增特异性、灵敏度和扩增效率等三项技术指标决定，为了改善PCR的扩增效果，研究人员通常设法提高该三方面的技术指标，以提高PCR临床检测的可靠性。在上述三项的技术指标中，显著的扩增特异性是高灵敏度和高扩增效率的前提，也是改善PCR检测准备性的主要研究方向。

在PCR技术发明初期，为了提高PCR的扩增特异性，在PCR循环开始，反应液加热到变性温度时加入DNA聚合酶，以此方法改善PCR特异性，随着技术的进步，逐渐发展到石蜡物理分隔反应组分、抗体修饰DNA聚合酶、化学修饰DNA聚合酶、修饰引物等等方法加以实现，在一定程度上提高了PCR扩增特异性，改善了扩增效果，但在一些情况下仍然存在非特异性扩增。

针对DNA聚合酶进行着手以提高PCR扩增特异性，为目前最常用的提高PCR特异性方法，包括化学修饰DNA聚合酶和在反应体中加入DNA聚合酶抗体。PCR中出现非特异性扩增的原因主要由于DNA聚合酶在较低的温度下，如室温，仍然具有较强的活性，导致在反应体系配制过程和进入PCR循环的退火阶段中，引物之间或者引物与模板非目的序列进行配对，经过PCR循环后，非目的序列获得大量扩增，出现了明显的副产物。利用化学方法，对DNA聚合酶进行修饰，可封闭DNA聚合酶活性，避免了反应体系配制过程中出现扩增反应，从而减少非特异产物产生；同理，DNA聚合酶抗体同样也可封闭DNA聚合酶活性，以防止非特异产物产生，同样可改善PCR的扩增特异性。但是，上述两种方法对DNA聚合酶活性封闭不彻底，仍然存在一定程度的非特异性扩增，而且上述两种方法DNA聚合酶的制备工艺复杂，生产条件苛刻，成本较高，进一步限制其应用。

因此，仍需要一种方法进一步提高PCR的扩增特异性，以进一步提高PCR的检测准确性。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够增强聚合酶链式反应扩增特异性的Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物及试剂盒。

Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。

在其中一个实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为0.001ng/μl至10ng/μl。

在其中一个实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为1ng/μl至4ng/μl。

在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

在其中一个实施例中，Hel112解旋酶为SsoHel112解旋酶。

一种用于增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物，所述组合物包括Hel112解旋酶，Hel112解旋酶用于添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。

在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的表达基因的碱基序列为SEQ ID NO.2。

在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的制备方法包括如下步骤：