[发明专利]一种牛冻精激活液

说明书

本申请属于生物技术领域和畜牧业人工授精技术领域，具体地，本申请提供了一种牛冻精激活液，其中包含大豆蛋白或小麦低聚肽的非动物源性蛋白，pH为7.0‑9.0。

技术领域

本申请属于生物技术领域和畜牧业人工授精技术领域，具体地，本申请提供了一种牛冻精激活液，其中包含大豆蛋白或小麦低聚肽的非动物源性蛋白，pH为7.0-9.0。

背景技术

精液冷冻保存是将精液用含特殊冷冻保护剂和营养成分等的稀释液稀释后，保存于液氮或干冰中，以达到在体外长期保存精子的目的。精液冷冻技术是现代畜牧业家畜品种保持/构建，特别是牛、羊品种保持/构建最重要的手段之一——人工授精中几乎必不可少的技术（鲜配受时间、地域、操作条件限制很大）。

精液冷冻技术最重要的指标是复苏/复温后精子的活力和完整度，目前细管牛羊精液解冻一般采用在30-50℃水浴中直接解冻5-40s的方法。实践中，这种方法虽然简单可靠，但由于样本质量、保存条件、操作失误（养殖厂环境中，操作大量样本时操作失误如解冻超时等常出现），经常出现复苏/复温后精子的活力和完整度，授精成功率不足/授精失败的问题，特别是对于较为珍贵/昂贵的，数量较少的精液样本（对于优质品种牛羊精液，经常由于保密、价格等原因经常无法获得足够试错用的精液样本），这种失败带来的经济和时间损失更为严重。

因此，本领域中有开发提高冻精复苏效果的方法/试剂的需求。

发明内容

申请人在冻精稀释液研究的基础上，进一步发现在冻精解冻后给予少量非动物源蛋白——大豆蛋白和小麦低聚肽，并且以较高pH环境处理可以有效提高解冻后精子活力和完整度并提高人工授精效果，进一步的研究表明，这样的处理还可以有效提高膜完整性和流动性（可能是人工授精效果提高的原因之一）。

一方面，本申请提供了一种牛冻精激活液，其中包含非动物源性蛋白、氯化钠和缓冲液成分。

进一步地，所述牛冻精激活液中的非动物源性蛋白为大豆蛋白或小麦低聚肽。

进一步地，所述牛冻精激活液中的非动物源性蛋白为小麦低聚肽。

进一步地，所述牛冻精激活液中缓冲液为Tris-HCl，pH为7.0-9.0。

进一步地，所述牛冻精激活液中缓冲液为0.2M的Tris-HCl，pH为8.5。

进一步地，所述牛冻精激活液组成为：每100mLpH为8.5的0.2M Tris-HCl缓冲液中，加入小麦低聚肽1g，NaCl 0.8g。

另一方面，本申请提供了上述牛冻精激活液在牛人工授精繁殖中的应用。

进一步地，所述应用中将解冻后的牛冻精和激活液混合，轻柔搅拌混合后静置，进行人工授精。

进一步地，所述应用中将解冻后的牛冻精按照牛冻精：激活液 3：1的比例混合，轻柔搅拌混合后静置10分钟。

本申请中的氯化钠、Tris、HCl、小麦低聚肽等成分可以选用符合相应标准的各生产商产品。Tris-HCl也可以选用市售成品。根据各生产商的大豆蛋白、小麦低聚肽产品性质的不同，配方可以做适当调整。

本申请的牛冻精激活液可用于各种自制和市售的各种牛冻精产品，只要其中所用冻精稀释液其中不包含与本申请的牛冻精激活液中成分有反应性的成分即可。

本申请的牛冻精激活液可用于各品种人工授精，包括但不限于安格斯牛、荷兰牛、神户肉牛、夏洛莱牛、西门塔尔牛、鲁西黄牛、大额牛等。经过本领域常规技术手段的改进和验证后也有望用于羊、马、猪等家畜。

具体实施方式

主要试剂和仪器

小麦低聚肽 食品级，河南兴源化工产品有限公司生产；