[发明专利]一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法

权利要求书

1.一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体的选择和消毒：将采集的外植体于超净工作台上消毒后接种在初代诱导培养基上；

(2)初代诱导培养基的筛选：将外植体切成适当大小接种在MY1+ZT0.5～1.0mg/L或者MY+ZT0.5～1.0mg/L培养基上，诱导不定芽；

(3)继代快速增殖培养基的筛选：将步骤(2)诱导出来的不定芽转入继代培养基中进行增殖培养，培养基为:MY+KT1.0～2.0mg/L+ZT 0.5～2.0mg/L+IBA0.1～0.3mg/L或者MY+6-BA1.0～3.0mg/L+ZT0.5～2.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L；

(4)生根培养基的筛选：将步骤(3)获得的丛生苗切成2～3cm的单株转入生根培养基中诱导生根，生根培养基为：1/2MY+NAA 0.1～0.3mg/L或者1/2MY+IBA0.1～0.3mg/L；

(5)培养条件：培养温度白天为23℃±2℃，夜间不低于15℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为1800～2000Lx；

步骤(1)所述过程如下：春季从定植三年的苗木上采集当年生枝条的茎尖、茎段作为外植体，将采集的外植体放入清水中浸泡，加入少量洗衣粉浸泡搅拌2～3min，然后放入流水冲洗4～6h，于超净工作台上用浓度为75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％的HgCl₂溶液消毒8～10min，然后用无菌水冲洗6～7次后接种在步骤(2)的培养基上；

所述的初代诱导、继代快速增殖培养基中含有的MY培养基成分构成如下：

①大量元素:NH₄NO₃ 400mg/L、CaCl₂·2H₂O 74mg/L、MgSO₄·7H₂O 246mg/L、KH₂PO₄114mg/L、K₂SO₄ 660mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 278mg/L组成；

②微量元素:MnSO₄·H₂O 22.3mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、ZnSO₄7H₂O 8.6mg/L、Na₂M_oO₄·2H₂O0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.25mg/L；

③铁盐:FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L和螯合剂为Na₂·EDTA·2H₂O 37.3mg/L的螯合物NaFe·EDTA 组成；

④有机物:C₆H₁₂O₆·2H₂O 100mg/L、NH₂CH₂COOH 2.0mg/L、C₈H₁₁O₃N·HCl 1.6mg/L、NC₅H₄COOH 0.5mg/L、C₁₂H₁₇C₁₀S·2HCl 1.0mg/L；

MY1培养基的成分构成:其中大量元素由浓度为NH₄NO₃ 400mg/L、CaCl₂·2H₂O 74mg/L、MgSO₄·7H₂O 246mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、K₂SO₄ 990mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 556mg/L组成，微量元素、铁盐、有机物成分与MY培养基相同；

所述的MY、MY1培养基中蔗糖含量为30g/L，1/2MY培养基中蔗糖含量为20g/L，MY、MY1、1/2MY培养基中琼脂粉含量为5～6g/L,pH值为5.5～5.8，培养基经高温灭菌20min，压力为1.1kg/cm²。