[发明专利]一种从关木通中分离纯化马兜铃酸类化合物的方法

说明书

本发明提供一种从关木通中快速分离纯化马兜铃酸类化合物的方法，本发明基于pH区带逆流色谱技术，在上相固定相和下相流动相中分别加入一定量的三氟乙酸和三乙胺，从而将关木通药材中的马兜铃酸类化合物实现有效的分离纯化，所述方法包括：将关木通粉碎后使用乙醇加热回流提取，减压浓缩得浸膏，用水混旋，使用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压蒸干得马兜铃酸总提取物；将总马兜铃酸类成分采用pH区带逆流色谱进行分离和富集，得到相应的组分，本发明制备成本低于现有技术，操作简便，效率高，耗时短，环境友好，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于化合物分离纯化技术领域，具体涉及一种从关木通中快速分离纯化马兜铃酸类化合物的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

关木通是马兜铃科植物东北马兜铃Aristolochia manshuriensis Kom.的干燥藤茎，古书记载有通经下乳、利小便、清心火等功效，临床上常用于口舌生疮、心烦尿赤、水肿、热淋涩痛等症，曾作为中药木通的替代品广泛应用于临床。其主要成分为马兜铃酸类成分，包括马兜铃酸I、马兜铃酸II、马兜铃酸IIIa、马兜铃酸IVa等。但是，上个世纪90年代，有学者发现临床上病人服用马兜铃属植物——中药广防己会导致肾功能急速衰竭。由此，引发了国内外对马兜铃科马兜铃属中草药的肾毒性的广泛关注和研究。研究表明，马兜铃酸类成分是此类植物产生毒性的罪魁祸首。虽然从2003年开始，中国药典陆续取消了含马兜铃酸的中草药，但是一些地方仍将存在混用的问题。因此，高纯度马兜铃酸类成分的分离纯化制备对中药及中成药的质量控制极为重要。

目前，马兜铃酸类成分主要是通过硅胶柱色谱、高效液相等方法从关木通中分离纯化，但是，发明人发现，上述分离纯化的方法存在分离效率低、溶剂消耗大等缺陷。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种从关木通中快速分离纯化马兜铃酸类化合物的方法，本发明基于pH区带逆流色谱技术，在上相固定相和下相流动相中分别加入一定量的三氟乙酸和三乙胺，从而将关木通药材中的马兜铃酸类化合物实现有效的分离纯化，因此具有良好的实际应用之价值。

本发明基于以下技术方案实现上述技术目的：

本发明的第一个方面，提供一种从关木通中快速分离纯化马兜铃酸类化合物的方法，所述方法包括：

将关木通粉碎后使用乙醇加热回流提取，减压浓缩得浸膏，用水混旋得混合物，依次使用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压蒸干得马兜铃酸总提取物；

马兜铃酸类化合物是弱极性化合物，采用上述提取方法，能够有效富集提取马兜铃酸类化合物，同时减少关木通其他有效成分的提取。

将马兜铃酸总提取物采用pH区带逆流色谱进行分离和富集，得到相应的组分；其中，所述分离采用石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系。

pH区带逆流色谱法是在普通制备型高速逆流色谱分离纯化有机酸类成分的应用基础上发展起来的一种特殊逆流色谱分离制备技术，依据化合物的pKa大小，被依次洗脱出来，尤其适合有机酸类物质的分离。pH区带逆流色谱法由于具备进样量高、分离效率高、分离效果好、杂质易收集、可实现pH监控、待分离组分被高度浓缩等优点，目前已被广泛应用于研究领域与实践中。由于马兜铃酸类化合物苯环上连接的基团不同，化合物的pKa大小有一定的差异，因此可以采用pH区带逆流色谱法进行富集和分离。

进一步的，所述石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系体积比为5:5:1:6-8:2:1:6；pH区带逆流色谱所用的溶剂体系是影响分离结果的重要因素，不同化合物之间，不具备借鉴意义。本发明所采用的石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水溶剂体系，具有环境友好、分离提取效率高，分离产物纯度高的特点。