[发明专利]一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的检测引物及其应用

说明书

本发明提供了一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的检测引物及其应用，本发明通过大量实验设计验证基于ARMS‑qPCR方法的特异性匹配rs10757278位点的引物，优化反应体系和反应条件，各步骤各条件相互配合，使其成功完成扩增和区分功能，显著提高检测的高特异性和灵敏性，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的检测引物及其应用。

背景技术

腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm，AAA)是指腹主动脉呈瘤样扩张，通常直径增大50％以上；该病的发生机制很复杂，遗传易感性、动脉粥样硬化以及各种蛋白酶等与其发生具有直接相关；年龄、性别、种族、家族史、吸烟等是该病发生的常见危险因素。西方的统计数据显示成年人中，＜60岁的AAA病人发病率＜0.1％，60-70岁为0.7％，＞70岁为5％-10％；男性发病率总体比女性高6倍，因而针对高危人群，建立一种高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要。

单核苷酸多态性(SNPs)是一类重要的遗传标记，具有密度高、富有代表性、较高的遗传稳定性等特点，广泛应用于各种疾病的临床诊断和用药治疗。rs10757278位点位于Chr9p21.3区域，该区域没有已知的编码基因，与CDKN2A/2B基因相近。研究表明，腹主动脉瘤的发生与该位点的突变有一定的联系。

ARMS-qPCR方法结合扩增阻滞突变系统(ARMS)和实时荧光定量PCR技术，设计等位基因特异性PCR扩增引物，在严格的条件下，只有引物3’碱基与模板完全配对时，PCR才会出现扩增，从而将有某种点突变的模板与正常模板区分开来。与传统测序方法相比，ARMS-qPCR方法具有高特异性和灵敏性，快速简单经济的优点。

因此，研发一种基于ARMS-qPCR方法的检测腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的引物及其应用，具有广阔的应用前景和巨大的是市场价值。

发明内容

为解决现有技术的不足和满足市场的需求，本发明提供了一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的检测引物及其应用，设计验证基于ARMS-qPCR方法的特异性匹配rs10757278位点的引物，优化反应体系和反应条件，使其成功完成扩增和区分功能，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs10757278的检测引物，所述引物包括1条正向引物和2条反向引物，所述1条正向引物具有如SEQ ID NO.1所示的序列或其互补序列，所述2条反向引物具有如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的序列或其互补序列。

其中，2条反向引物分别对应rs10757278位点(A/G)的多态性。

SEQ ID NO.1如下：CAGCCAATTTGTGGAGTGTCA.

SEQ ID NO.2如下：CTTGATTCTGCATCGCTTCC.

SEQ ID NO.3如下：GTCTTGATTCTGCATCGCTTCT.

优选地，所述引物为ARMS-qPCR方法的检测引物。

本发明中，发明人在长期科研实践过程中，为提高检测灵敏度和准确性，通过大量实验设计验证基于ARMS-qPCR方法的特异性匹配rs10757278位点的引物，突变型反向引物3’端为弱错配(G/T)，因此在引物倒数第三个碱基增加强错配(C/T)；优化反应体系和反应条件：退火温度在58摄氏度上下调整；各步骤各条件相互配合，使其成功完成扩增和区分功能，显著提高检测的高特异性和灵敏性，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。