[发明专利]一种胆固醇含量检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提出一种胆固醇含量检测试剂盒及检测方法，属于胆固醇含量检测技术领域，其检测灵敏度高、特异性强、线性范围宽，而且，该胆固醇含量检测试剂盒中的各试剂均较为稳定，易于储存。该胆固醇含量检测试剂盒，包括如下试剂：氢氧化钾乙醇溶液、正己烷水溶液、Triton X‑100异丙醇溶液、溶液A、胆固醇氧化酶溶液、氧化镨溶液和荧光标记DNA探针溶液；其中，所述溶液A包含缓冲液。

技术领域

本发明属于胆固醇含量检测技术领域，尤其涉及一种胆固醇含量检测试剂盒及检测方法。

背景技术

目前，国内外实验室中，通常都是采用商品化的酶法试剂盒在全自动仪器上检测血清中总胆固醇含量(total cholesterol，TC)。酶法检测血清TC的原理是以胆固醇酯酶水解胆固醇酯为游离胆固醇，以胆固醇氧化酶氧化胆固醇生成4-烯胆甾烷酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与酚类或苯胺类化合物及4-氨基安替比林或其类似物发生氧化、缩合反应，产生最大吸收波长为500～600nm的醌亚胺类化合物(Trinder反应)，在一定浓度范围内，醌亚胺类化合物的浓度与血清TC浓度呈正比，进而通过检测醌亚胺类化合物含量获得血清TC浓度。然而，现有酶法检测血清TC的灵敏度和特异性比较低，线性范围较窄，不能满足高浓度的胆固醇检测，在检测高浓度胆固醇时必须进行一定倍数的稀释，而且，天然酶不易储存、易变性。因此，如何提供一种灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定的胆固醇含量检测试剂盒及检测方法，是当前急需解决的一项技术难题。

发明内容

本发明针对上述的技术难题，提出一种胆固醇含量检测试剂盒及检测方法，其检测灵敏度高、特异性强、线性范围宽，而且，该胆固醇含量检测试剂盒中的各试剂均较为稳定，易于储存。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种胆固醇含量检测试剂盒，包括如下试剂：氢氧化钾乙醇溶液、正己烷水溶液、Triton X-100异丙醇溶液、溶液A、胆固醇氧化酶溶液、氧化镨溶液和荧光标记DNA探针溶液；其中，所述溶液A包含缓冲液。

作为优选，所述溶液A还包括氯化钠。

作为优选，所述荧光标记DNA探针为5’端用FAM标记的腺嘌呤五聚体，所述腺嘌呤五聚体的序列为5’-AAAAA-3’。

作为优选，所述缓冲液为Hepes缓冲液或醋酸缓冲液。

作为优选，所述氢氧化钾乙醇溶液的浓度为7-10mmol/L；所述正己烷水溶液中正己烷的体积百分比为60％-70％；所述Triton X-100异丙醇溶液中Triton X-100的体积百分比为30％-50％；所述溶液A中缓冲液的浓度为5-20mmol/L，pH为7-8；所述胆固醇氧化酶溶液的浓度为2-10mg/mL；所述氧化镨溶液的浓度为16-166μmol/L；所述荧光标记DNA探针溶液的浓度为5-10nmol/L。

作为优选，所述氢氧化钾乙醇溶液的浓度为8.9mmol/L；所述正己烷水溶液中正己烷与水的体积比为2:1；所述Triton X-100异丙醇溶液中Triton X-100与异丙醇的体积比为2:3；所述溶液A中缓冲液的浓度为10mmol/L，pH为7.6；所述胆固醇氧化酶溶液的浓度为5mg/mL；所述氧化镨溶液的浓度为66μmol/L；所述荧光标记DNA探针溶液的浓度为6nmol/L。

作为优选，所述溶液A中氯化钠的浓度为30-200mmol/L。

作为优选，所述溶液A中氯化钠的浓度为150mmol/L。

本发明还提供了一种胆固醇含量检测方法，使用上述任一项技术方案所述的胆固醇含量检测试剂盒进行检测，包括如下步骤：