[发明专利]一种掷孢酵母和利用响应面法优化提取类胡萝卜素的方法

权利要求书

1.一种提取掷孢酵母中类胡萝卜素的方法，其特征在于：包括以下步骤，

1) 掷孢酵母的发酵培养：取培养40-48 h新鲜掷孢酵母种子液，分别以5%接种量加入30只盛有100 ml发酵培养基的1000 ml三角瓶中，振荡培养；其中，所述发酵培养基的成分为20g/L蔗糖、10g/L蛋白胨和10g/L酵母膏，pH为6.0-6.5，所述振荡培养的温度为12-32℃、转速为180r/min；

2) 湿细胞获取：将上述3000 ml发酵液装入离心管中，冷冻离心，倒去上清液，加入少许无菌水洗涤，再次冷冻离心，倒去上清液，合并适量离心湿细胞至另一已恒重的干净离心管中，倒置并吹干离心管管壁和管盖上的水分，直至恒重，获得已恒重的湿细胞；

3) 酸热破碎：取已恒重的湿细胞，转移到清洁的玻璃试管中，在4.5mol/L 盐酸浓度、3.6 ml/g细胞湿重的盐酸用量、30min盐酸浸泡时间、4.1min 沸水浴时间和1.0-4.0g细胞湿重条件下进行酸-热破碎后，迅速冷却，取出试管，将细胞泥倒入离心管中，离心，弃去上清液，得细胞碎片沉淀，水冲洗，再离心，弃去上清液，即得已破碎的细胞；

4) 类胡萝卜素的提取：向已破碎的细胞中加入10 ml丙酮水溶液萃取，用旋涡振荡器振荡后离心，将上清液倒入另一支干净的试管中，得到丙酮的类胡萝卜素的提取液，重复提取3次；

所述掷孢酵母于2019年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.17429。

2.根据权利要求1所述的提取掷孢酵母中类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤1)中新鲜掷孢酵母种子液的含菌量为5.0~10.0×10⁸个/ml。

3.根据权利要求2所述的提取掷孢酵母中类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤2)中两次冷冻离心条件均为3000 r/min、4℃下离心15-20min。

4.根据权利要求3所述的提取掷孢酵母中类胡萝卜素的方法，其特征在于：步骤3)中两次离心温度为4℃，离心转速均为4000 r/min，离心时间均为15-20min。

5.根据权利要求4所述的提取掷孢酵母中类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤4)中涡旋时间为30 min，离心温度为4℃，离心转速为4000 r/min，离心时间为15 min。