[发明专利]一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针及其应用

说明书

本发明涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针及其应用，属于医疗检测技术领域。一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针，其包括：上游引物COL1A1‑F具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；下游引物COL1A1‑R具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；COL1A1基因rs72656353探针具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；内参探针具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针及其应用，属于医疗检测技术领域。

背景技术

成骨不全(osteogenesis imperfecta，OI)是一种先天性骨骼发育障碍性疾病，又称脆骨病或脆骨-蓝巩膜-耳聋综合征。以骨量低下、骨脆性增加和反复骨折为主要特征，还可表现有蓝巩膜、牙本质发育不全、关节韧带松弛、听力下降、心瓣膜病变和身材矮小等复杂骨骼外表现，是一种由于间充质组织发育不全，胶原形成障碍而造成的先天性遗传性疾病。

成骨不全是一组具有表型异质性的单基因遗传性骨病，其新生儿的患病率为1/10000-20000。根据表型该病具有常染色体显性遗传和常染色体隐性遗传，男女发病无差别。1979年Sillence提出的从遗传学角度对该病进行分型：Ⅰ-Ⅳ型；随着对该病致病原理的研究，根据临床表现和遗传特征，该疾病被分为14种类型(Ⅰ～ⅪⅤ型)，已经发现OI的致病基因已达19种。研究表明，OI的致病目前认为主要是由编码Ⅰ型胶原基因突变所引起，约90％的成骨不全患者有COL1A1基因的突变。COL1A1基因位于17号染色体长臂第二区1.3带和2.1带(17q21.3，17q22.1)，起于45 616 455bp，止于45 633 991bp，全长17537bp。其中rs72656353为该基因的一个致病突变位点，由A突变为G。

目前产前诊断主要依靠超声学检查胎儿的骨骼系统，可早期发现先天性骨发育障碍疾病，但是，由于该病分为先天型及迟发型两种，迟发型不能被检测出来。随着分子诊断技术的迅速发展，基因检测手段日益发展，在孕妇血液中，约有10％-15％的cfDNA来自于胎盘滋养层，这意味着可以通过母亲外周血测序分析其中的cfDNA信息有一部分是胎儿的，所以产前胎儿基因检测常用来辅助鉴定由于基因突变引起的疾病，在OI致病基因诊断技术应用过程中，基因测序是当前比较常用的成骨不全致病基因检测方法，但是需要昂贵的检测设备和繁琐的鉴定流程，这就对相关检测部门的实验条件提出了更高的要求，因此会存在着较多的局限性，不利于大范围推广应用。繁琐的鉴定流程就意味着时间的延长，就会增加整个过程中污染的可能性，而且对于需要检测的人群来说会大量增加等待的时间，同时也会产生较高的费用，这些都意味着现有的检测技术无法满足在人群中普遍筛查的要求，适用性不强。

发明内容

本发明主要是针对现有成骨不全致病基因COL1A1产前检测耗费时间长、费用高和不适用于大范围推广的问题，提供一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针。

本发明还提供一种判定方式更加直观、操作简便、成本低、实用性强的成骨不全致病基因COL1A1产前检测试剂盒。

本发明的目的主要是通过下述方案得以实现的：

一种成骨不全致病基因COL1A1的引物组合物及探针，其包括：

上游引物COL1A1-F具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列(5'GCGTACACCACCGTTCA3')；

下游引物COL1A1-R具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列(5'CTCAGAACTCTTCAGGCT 3')；

COL1A1基因rs72656353探针具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列(5'ACATGCAGAGCGTGACCA 3')；