[发明专利]黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法

权利要求书

1.黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的方法包括以下的步骤：

(1)标准样品的制备

木樨草素-7-O-葡萄糖甙(L7G)标准液：1mg木樨草素-7-O-葡萄糖甙，甲醇溶解定容至10mL，低温保存备用，使用时，用含有2％甲酸的50％甲醇溶液将其分别稀释配制为0mg/L，5mg/L，10mg/L，20mg/L，40mg/L，50mg/L的标准溶液，置于-20℃冰箱保存；

(2)检测样品的制备

将黄参茎叶进行清洗烘干粉碎、过60目筛得到黄参茎叶粉末，再将粉末通过超声辅助法得到黄参茎叶多酚粗提物，经大孔吸附树脂分离纯化，得到黄参茎叶多酚纯化物，黄参茎叶多酚纯化物用色谱级甲醇配置为浓度为1mg/mL的黄参茎叶多酚溶液，过0.45μm水系滤膜，样品放置于-20℃冰箱保存待测；

(3)色谱条件

色谱柱：Merk公司，250-4反相C18柱，250×4.6mm,5μm；流动相组成：A：甲醇：冰乙酸的体积比为99.7:0.3，B：甲醇：冰乙酸：超纯水的体积比为10:0.3:89.7；液相洗脱梯度：洗脱条件为：0～10分钟：A，30％；B，70％；10～60分钟：A，30％～44％；B，70％～56％；进样量：10μL；柱温：30℃；流速：0.4mL；紫外检测波长：280nm；

(4)质谱分析条件

离子源：电喷雾(ESI)离子源；扫描方式：负离子扫描；一级质谱检测方式：MS2scan模式进行全扫；二级质谱检测方式：production模式；特征离子：447，489m/z；CE(collisionenergy)碰撞能量：25eV。

2.根据权利要求1所述的黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中黄参茎叶多酚粗提物的制备方法为：将黄参茎叶粉末在超声频率和超声功率分别为80Hz和200W的条件下，用体积分数为75％的乙醇在料液比为1g：35mL，温度为70℃的条件下超声提取2次，每次提取30分钟，得到黄参茎叶多酚提取液；

将黄参茎叶多酚提取液在4000g/分钟的转速下离心，取上清液旋转蒸发得到膏状物，将膏状物溶于体积分数为20％的乙醇并加入石油醚萃取，取上层溶液浓缩成浆状，冷冻干燥，得到黄参茎叶多酚粗提物。

3.根据权利要求1或2所述的黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中大孔树脂为X-5型大孔树脂。

4.根据权利要求3所述的黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中用大孔树脂对黄参茎叶多酚吸附的工艺参数为：上柱液质量浓度为2mg/mL、上柱液pH值为2.0、吸附流速为1.5mL/分钟。

5.根据权利要求4所述的黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中用大孔树脂对黄参茎叶多酚解吸的工艺参数为：洗脱剂为70％的乙醇溶液、洗脱流速为1.5mL/分钟、洗脱剂用量为400mL。