[发明专利]一种促进除草剂降解的方法

说明书

本发明公开了一种促进除草剂降解的方法，属于生物技术领域，该方法利用本实验纯化出的白灵菇菌渣漆酶降解除草剂异丙隆，采用单因素实验和响应面法研究异丙隆初始浓度、白灵菇菌渣漆酶活力及反应温度、pH值、反应体系体积对异丙隆降解率的影响，确定白灵菇菌渣漆酶降解异丙隆的最佳反应条件为：异丙隆初始浓度10mg/L，白灵菇菌渣漆酶活力300U/mL，反应温度为40℃，pH值为6.4，反应体系体积为5mL，此条件下理论降解率为78.27％。本发明反应条件温和，降解率高，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种促进除草剂降解的方法，具体地说，涉及一种促进除草剂异丙隆降解的方法。

背景技术

漆酶(Laccase，EC 1.10.3.2)，全称为对苯二酚：(双)氧氧化还原酶，又名酚酶、多酚氧化酶、漆酚氧化酶，其实质是一种含铜的氧化酶，和植物中的抗坏血酸氧化酶、动物中的血浆铜蓝蛋白同属于蓝色多铜氧化酶的家族。漆酶降解具有特异性、无二次污染及反应条件比较温和等特性，这使得漆酶在农药和染料的降解、造纸业、食品工业、能源和生物检测等方面具有广泛的应用。异丙隆是一种取代脲类选择性内吸传导型除草剂，具有适用作物范围广、除草谱宽且效果好，是我国应用最广、使用量最大的麦田除草剂之一。但是异丙隆的大量使用会造成水体和土壤的污染，并且通过食物链传递将污染范围扩大。利用漆酶降解环境中难降解的污染物-异丙隆，反应条件温和，能够避免出现再次污染，具有很大的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进除草剂降解的方法。该方法利用一种新的白灵菇菌渣漆酶能够有效的降解除草剂异丙隆，降低其危害。

其具体技术方案为：

一种促进除草剂降解的方法，包括以下步骤：

步骤1、采用C18反相色谱柱高效液相色谱对异丙隆进行检测，检测波长为241nm；流动相为甲醇∶水＝70∶30V/V；流速0.6mL/min；进样量20μL，异丙隆初始浓度10mg/L；

步骤2、在离心管中加入pH值为6.37-6.4的白灵菇菌渣漆酶和步骤1的异丙隆溶液，白灵菇菌渣漆酶活力300U/mL，震荡均匀后在40℃下水浴反应，反应体系体积为4.95-5mL；

步骤3、将反应后的样品经过微滤处理按步骤1中的条件：C18反相色谱柱，检测波长241nm；流动相为甲醇：水＝70：30V/V；流速0.6mL/min；进样量20μL，进行高效液相色谱检测出反应后样品中残余异丙隆浓度。降解率的计算公式为：异丙隆降解率(％)＝100×(初始浓度-残余浓度)/初始浓度。

进一步，步骤1中，采用C18反相色谱柱为150mm×4.6mm，5μm。

进一步，步骤2中，所述pH值为6.4。

进一步，步骤2中，所述反应体系体积为5mL。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明的实验设计科学，漆酶原料是出过菇的白灵菇菌渣简单易得，且除草剂降解条件温和，能够避免出现再次污染，具有很大的应用前景。