[发明专利]一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法

说明书

本发明提供了一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法，属于节肢动物解剖学领域。本发明在不破坏小菜蛾表皮和其他组织的情况下，使用昆虫解剖刀割开尾部小口，并寻找着力点，快速抽拽出小菜蛾幼虫完整的肠道组织，能够最大程度保证其肠道的完整性，与传统解剖手段相比，本方法能大幅度缩短解剖时间，整个解剖过程只需30‑60s，且能减少材料的污染和浪费，避免组织的降解，为后续肠道组织特异性和肠道微生物等研究提供了良好的基础实验材料。

技术领域

本发明涉及节肢动物解剖学领域技术领域，尤其涉及一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法。

背景技术

小菜蛾属于节肢动物门昆虫纲鳞翅目绢丝昆虫，初孵化的幼虫为深褐色，随后变为绿色。末龄幼虫呈纺锤形，体节明显，表皮上长有黑色的刚毛。其腹部内有脂肪体，丝腺，中场，马氏管等组织。

小菜蛾幼虫是十字花科植物的害虫，分布广泛，对农业生产危害巨大，以其肠道为研究材料，对十字花科农作物的虫害防治及新型生物农药的开发具有重要意义。

小菜蛾幼虫解剖是研究其内部结构的重要技术，是进行小菜蛾幼虫肠道与其生理生化反应和生长发育之间联系的前提基础。然而小菜蛾幼虫体型较小，末龄幼虫的体长约为10-12mm，由于其肠道细长且脆弱，常规体表解剖法极易对其肠道造成机械损伤，造成肠道内容物外泄，污染体内其他组织，并且浪费大量时间，而长时间的解剖操作会造成样品组织材料的降解。

经过检索国内外现有文献，目前尚未有快速分离小菜蛾幼虫肠道的方法报道。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法，该方法能在短时间内获得完整的小菜蛾幼虫肠道，避免了常规解剖造成的机械损伤，减少了实验材料的污染和浪费，为后续肠道组织特异性和肠道微生物分析等研究提供了良好的基础实验材料。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法，包括以下步骤：

步骤S1：将待解剖的小菜蛾幼虫致死后进行体表消毒；

步骤S2：将经步骤S1处理后的小菜蛾幼虫浸入解剖操作液中，并使其在解剖操作液中充分舒展开；

步骤S3：利用昆虫解剖镊夹住小菜蛾幼虫的口器部分，利用昆虫解剖刀在其尾部1.8-2.2mm处隔开一个直径为0.5-1mm的小口，露出黄绿色肠道；

步骤S4：用昆虫解剖刀背部钝面按压尾部表皮，并沿着昆虫身体轴线方向，轻轻快速拖拽出整个小菜蛾幼虫肠道，获得尾部沾有部分表皮和大量呈黄色线状组织的马氏管的肠道；

步骤S5：利用昆虫解剖刀，将步骤S4获得的肠道尾部的部分表皮与中肠切开，使用昆虫解剖镊将肠道尾部的马氏管摘除，获得完整的小菜蛾肠道，完整的小菜蛾肠道呈透明或浅绿色。

进一步优选地，所述步骤S1的致死方法包括：冷冻致死和乙醚毒杀。

进一步优选地，所述步骤S1的体表消毒方法包括：用含有75％质量比酒精的脱脂棉擦拭小菜蛾幼虫体表4-10次。

进一步优选地，所述步骤S2的使小菜蛾幼虫在解剖操作液中充分舒展开的方法包括：利用美工勾线笔的软毛刷抚刷小菜蛾幼虫表面，至小菜蛾幼虫充分舒展。

进一步优选地，所述解剖操作液为昆虫生理盐水或1×PBS(PH7.4)缓冲液。