[发明专利]一种快速繁殖铁皮石斛种苗的方法

说明书

本发明公开了一种快速繁殖铁皮石斛种苗的方法，步骤如下：铁皮石斛成熟蒴果制作种子悬浮液，点播至一步成苗培养。本发明可以使铁皮石斛种子在没有填加任何激素的有机物培养基中，不需要转接，即可完成铁皮石斛从种子直接分化、生长发育为8～10cm带有根茎叶的健壮小苗。不仅消除了成苗过程中的人工转接次数，降低了人工成本与转接带来的组培苗污染率，并且消除了因转接伤苗带来的缓苗期，从而缩短了铁皮石斛组培苗的生长周期，极大程度上简化了铁皮石斛种苗的生产步骤，降低了生产成本，还可以避免组培过程中由于激素添加引起的铁皮石斛组培苗的遗传变异，从而最大限度上保持其原有性状，可作为铁皮石斛组培苗生产的重要方法。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种快速繁殖铁皮石斛种苗的方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属草本植物，又名黑节草，是中国传统名贵中药之一，位居中华九大仙草之首。因其种子极为细小，胚胎发育不完全，且无胚乳组织，在自然状态下萌发率极低，自然繁殖能力也较弱。再加上生态环境日益遭受严重破坏，野生铁皮石斛资源濒临灭绝，现已被国家列为重点保护的药用植物之一。为了保护这一濒危的名贵中药，国内外研究者们开展了铁皮石斛的组培快繁、种子萌发及菌根方面的繁殖研究，并取得了较好的进展，实现了快速繁殖种苗化生产与人工集约化栽培。

铁皮石斛种苗主要通过植物组织培来获取。虽然现有组织培养技术已经不断进行改进，并已形成了以种子为外植体的三步成苗的工艺流程：种子无菌萌发→丛生苗壮苗→大苗生根。但是此流程需要进行三次转接，步骤依旧繁琐，多次的换瓶转接，不仅浪费人力、财力、物力，而且增大组培苗的污染率，从而导致铁皮石斛组培苗出瓶率的降低，造成种苗生产成本居高不下。而且，培养基中激素的添加对铁皮石斛组培苗的成长存在着一定的影响，不当的激素添加则可能造成组培苗的性状与遗传变异。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种快速繁殖铁皮石斛种苗的方法，所述方法相比于现有的培养方法，操作简单，节省人工，污染率低，生产成本低，而且组培苗出瓶率高，种苗性状稳定。

本发明所述的一种快速繁殖铁皮石斛种苗的方法，包括以下步骤：

(1)摘取授粉植株结出的成熟的蒴果；

(2)制作种子悬浮液：将步骤(1)摘取的铁皮石斛蒴果消毒，清洗，将蒴果从顶部切一个圆孔，置于无菌水上方，制成浓度为30～50粒/毫升的种子悬浮液；

(3)无菌播种：吸取配好的种子悬浮液1ml于无激素一次成苗培养基中进行点播，每毫升培养液分5-7滴点播，相邻每滴间间隔1.5～2.0cm；

(4)一步成苗培养：组培室进行培养，八个月以后即可长成8～10cm的带有根茎叶的健壮小苗。

进一步的，本发明提供一种步骤(1)获取成熟的蒴果的方法：在四月份中旬，于铁皮石斛种植区内选取三年生的紫杆、软脚生长健壮的铁皮石斛开花植株进行人工异花授粉；待授粉植株长到十一月份时，摘取授粉植株结出的成熟的蒴果。

本发明所述的选取三年生的紫杆、软脚生长健壮的铁皮石斛，在于三年生的铁皮石斛授粉成功率高；茎秆呈紫色的铁皮石斛品质比茎秆呈青色、青黄色的铁皮石斛品质好；软脚铁皮石斛比硬脚铁皮石斛的茎含有的纤维更少，因此嚼之残渣少，品质优良。

步骤(1)中所述的成熟蒴果，一般是蒴果外部果皮颜色由绿泛白，内部种子为黄绿色粉末时，表明蒴果成熟，摘取的蒴果，可以存放于冰箱备用。

进一步，步骤(2)中消毒的详细步骤为：蒴果在75％的酒精里浸泡25～30s，然后置于0.1％的升汞溶液中浸泡5～8min；浸泡时蒴果应全部浸入溶液中，以防止不必要的污染；消毒之后再用无菌水漂洗4～5次。