[发明专利]罗非鱼氧化应激肝损伤模型及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了罗非鱼氧化应激肝损伤模型及其构建方法和应用，所述方法采用注射H₂O₂构建损伤模型。其优点在于：(1)本发明所述方法使用的罗非鱼来源一致，培养环境可控，因此可重复性强；(2)本发明所述方法首次将H₂O₂应用于鱼类肝损伤模型构建中，得到了能够研究肝脏疾病发病机制以及筛选相关治疗药物的理想罗非鱼实验模型。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，涉及一种鱼类损伤模型的构建方法，具体为罗非鱼氧化应激肝损伤模型及其构建方法和应用。

背景技术

肝脏是鱼类物质和能量代谢的主要器官，也是机体重要的屏障器官，其解毒和吞噬功能对机体具有保护作用。肝损伤或病变往往导致机体代谢机能紊乱和抗病力降低，极易造成继发传染性疾病的爆发。近年来肝胆综合症、脂肪肝病和化学性肝损伤等肝脏疾病在多种鱼类中频繁发生，死亡率达50％-60％，病因复杂，但共同点为均伴随着严重的氧化应激(oxidative stress)。水环境中多种胁迫因子，如氨氮、亚硝酸盐、有机毒物、重金属等也可引起氧化应激，并导致鱼类肝损伤发生。因此，氧化应激被认为是鱼类多种肝损伤疾病的共同诱发因素。

肝损伤模型是为更好的研究肝脏疾病发病机制以及筛选相关治疗药物而构建的一种理想动物实验模型。然而在鱼类中，关于肝损伤模型研究还比较少，因此严重制约鱼类肝损伤机制以及保肝药物的筛选和开发。目前，尚未发现有关鱼类氧化应激肝损伤模型的构建方法。

过氧化氢(H₂O₂)是重要的氧自由基(ROS)之一，可引起细胞膜氧化损伤。在哺乳动物和人肝细胞研究中，研究者利用H₂O₂诱导肝细胞建立氧化损伤模型，并通过此模型筛选多种保肝药物。但目前尚未发现采用H₂O₂诱导鱼类肝损伤的相关报道。

发明内容

解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，为了更好的研究肝脏疾病发病机制以及筛选相关治疗药物而构建的一种理想动物实验模型，本发明提供了罗非鱼氧化应激肝损伤模型及其构建方法和应用。

技术方案：罗非鱼氧化应激肝损伤模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：

第1步、驯化

将健康的罗非鱼养殖于循环水系统中，驯化2周，驯化期间投喂基础饲料，养殖条件为：温度30±2℃，溶氧>6mg/L，pH 7.4–8.1，氨氮含量<0.2mg/L，亚硝酸盐含量<0.2mg/L；

第2步、诱导

取第1步驯化后的罗非鱼，腹腔注射H₂O₂，注射剂量为1-3mL/kg，H₂O₂的浓度为40-400mM；

第3步、检测

注射24～72h后，麻醉后采集血液和肝组织，在血液中测定肝损伤指标：谷草转氨酶与谷丙转氨酶；在肝组织中测定氧化应激指标：过氧化物歧化酶和丙二醛；通过病理切片分析肝组织损伤程度。

优选的，第1步中，按重量份计，基础饲料为：粗蛋白28份，粗脂肪5份,灰分15份,粗纤维12份,磷元素0.6份和水12.5份。

优选的，第2步中，H₂O₂的浓度为300mM，注射剂量为3mL/kg。

优选的，第3步中，对肝损伤指标和氧化应激指标的测定数据使用SPSS20.0软件进行数据分析，并通过One-way ANOVA分析，对不同组间数据进行Tukey多重比较。

以上任一所述方法构建的罗非鱼氧化应激肝损伤模型。