[发明专利]一种酶组合物

说明书

本发明涉及一种N端缺失60至120个氨基酸的酪氨酸羟化酶变体，以及一种药物组合物，其包括N端缺失60至120个氨基酸的酪氨酸羟化酶变体和芳香族L‑氨基酸脱羧酶；本发明还涉及包括所述酪氨酸羟化酶变体或所述药物组合物的核苷酸构建体、载体质粒、细胞、病毒，以及所述病毒在制备治疗退行性疾病例如帕金森病药物中的用途。

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，其包括酪氨酸羟化酶变体和芳香族L-氨基酸脱羧酶，和其核苷酸构建体、载体质粒、细胞、病毒，以及所述病毒在制备治疗退行性疾病例如帕金森病药物中的用途。属于基因工程技术领域。

背景技术

帕金森病(Parkinson's Disease,PD)是一类严重的神经退行性疾病，以震颤、僵硬和运动障碍为主要症状。病理上主要表现为位于大脑黑质区(substantia nigra,SN)的多巴胺(dopamine)能神经元的进行性退化。上述病变将造成纹状体(Striatum)区域的多巴胺能神经元的投射减少及此区域多巴胺浓度的降低。因此，增加纹状体区域多巴胺能传递的药理学方法是治疗PD的有效手段。多巴胺替代疗法，即口服左旋多巴(L-Dopa)，是目前最主要的药物疗法。虽然此疗法在短期内显著改善了PD患者的生活质量，但多巴胺替代疗法的有效性会随着时间逐渐降低，在超过5到10年后，所有患者的病情会最终进展到口服左旋多巴难以治疗的地步。

酶替代疗法(enzyme replacement therapies)的目的是补偿由于黑质区域多巴胺能神经元退化所引起的多巴胺释放的减少。上述方法原理是将编码多巴胺合成所需的酶的基因递送到纹状体的GABA能神经元中。在此条件下，GABA能神经元能够持续异位合成多巴胺，并在相应的纹状体区域释放。这种方法可以减少运动障碍的发生，并限制由基底神经节(basal ganglia)外多巴胺水平升高所引起的副作用。然而，多巴胺浓度升高会负反馈调节酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的活性，从而限制其异位合成多巴胺的能力。

因此，寻找疗效更佳的酶替代疗法对于治疗帕金森病至关重要。

发明内容

本发明提供了一种酪氨酸羟化酶(又简称TH)变体，其中，所述酪氨酸羟化酶变体包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的N端缺失60至120个氨基酸的人酪氨酸羟化酶，优选所述酪氨酸羟化酶变体包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的N端缺失80至100个氨基酸的人酪氨酸羟化酶，更优选为，如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的N端缺失80至90个氨基酸的人酪氨酸羟化酶，例如如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的N端缺失80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、92、94、95、96、97、98、99、或100个氨基酸的人酪氨酸羟化酶。

在一个实施例中，所述酪氨酸羟化酶变体包括如SEQ ID NO:2所示的蛋白或与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有80％序列同一性的酪氨酸羟化酶衍生物，例如80％、90％、95％、99％以上同一性，其中，所述衍生物为由SEQ ID NO:1所示氨基酸序列经过一个或少数几个例如2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的且具有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白功能的酪氨酸羟化酶变体，其活性为如SEQ ID NO:1所示蛋白的50％以上，例如60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％以上。所述酪氨酸羟化酶变体可选择性包含标签蛋白，所述标签蛋白包括但不限于HA、Myc、Flag。

在另一方面，本发明还提供了一种组合物，包括如前所述酪氨酸羟化酶变体。