[发明专利]一种辣椒及制品中转基因成分检测及应用方法

说明书

本发明属于食品安全技术领域，公开了一种辣椒及制品中转基因成分检测及应用方法，辣椒及制品中转基因成分检测方法为：样品前处理；选用改良后的核酸提取方法；针对辣椒转基因基团设计特异性的荧光PCR引物、探针，建立并优化反应条件，达到最佳反应设置；应用方法为：对以上建立的实时荧光PCR检测方法进行方法验证，同时对检测的特异性、准确性、灵敏度进行验证；通过对收集的样品进行应用检测的结果，对市场上的辣椒及制品进行转基因调查。本发明针对辣椒及制品的核酸提取，建立了最大核酸提取效率的方法，并且对辣椒及制品建立了一种通用性强、检测快速、准确的实时荧光PCR方法。

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，尤其涉及一种辣椒及制品中转基因成分检测及应用方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：随着辣椒消费需求的不断增加及初加工、深加工行业的不断发展，国际加工辣椒需求量的增加，辣椒的产量和品质倍受关注，然而病虫害及不良环境因素严重影响了辣椒产量和品质的提高。较常规育种而言，转基因育种技术有着育种周期短、克服远缘杂交不亲和等优点。但是由于对转基因作物及其产品的安全性存在争议，对人类健康和生态环境的潜在威胁受到国际社会和广大民众的广泛关注，同时受国际政治和经济因素的影响，许多国家出台了严格的管理法规，目前全球已有65个国家和地区对转基因产品实行强制性标识管理制度，少部分国家或地区实行自愿标识制度。欧盟、澳大利亚、俄罗斯、日本、韩国等国家和地区的转基因产品标签制度，要求食品中转基因成分含量超过1％或5％的必须实施标签，而欧盟的要求阈值更加严格，由原来的1％(1997年)提高到0.9％(2003年)。在这些国家和地区对转基因的管理法规越来越严格的形势下，我国作为辣椒的种植、生产、出口大国，容易受到严重的影响，尤其是在全国辣椒及制品出口额逐年上升的良好态势下，转基因的风险系数不断提高。目前已出现部分出口产品因转基因问题而出现拒收、退运等情况，因此，对辣椒及制品进行转基因风险分析势在必行。

由于转基因作物及其产品的安全性成为全球范围内的关注热点，对转基因成分的检测越来越受到重视。DNA是遗传信息的载体，提取高质量的DNA分子是植物基因组学及转基因检测研究的基础，通常要求所提取的DNA分子应具有较高的纯度，且无断裂、降解现象，提取过程尽量少使用有毒的化学药品以保证下游工作的进行。由于辣椒制品成分复杂，辣椒中富含的酚类化合物、蛋白质、多糖等物质会抑制DNA提取质量；同时还含有盐、糖、油、色素等食品添加剂，此外，加工过程中的煎、炸、煮、烤等工艺也会使原料中的DNA会受到不同程度的损坏。因此，从加工食品中提取DNA比从原材料中提取DNA相对的困难。所以，目前国内外对辣椒及制品中转基因成分检测技术研究较少，检测技术无法跟进辣椒转基因技术的发展，既不利于转基因物种监管，也不利于避免国际贸易中设置的技术壁垒。因此，对辣椒及制品中转基因成分检测方法的研究，建立快速、准确的检测技术就显得尤为迫切。

综上所述，现有技术存在的问题是：

由于辣椒制品成分复杂，辣椒中富含的酚类化合物、蛋白质、多糖等物质会抑制DNA提取质量；同时还含有盐、糖、油、色素等食品添加剂，此外，加工过程中的煎、炸、煮、烤等工艺也会使原料中的DNA会受到不同程度的损坏。因此，从加工食品中提取DNA比从原材料中提取DNA相对的困难。所以目前国内外对辣椒及制品中转基因成分检测技术研究较少，检测技术无法跟进辣椒转基因技术的发展，既不利于转基因物种监管，也不利于避免国际贸易中设置的技术壁垒。

解决上述技术问题的难度和意义：

目前针对辣椒的转基因研究，多集中于遗传育种研究机构对其各自研发品种进行的分析，如进行转抗菌肽基因辣椒蛋白质检测，辣椒农杆菌介导转化体系的建立及外源基因的转化、抗CMV和TMV转基因线辣椒等，为辣椒转基因品种的表达分析研究，没有针对市场上常见辣椒转基因品种进行有效的、通用的检测技术研究，检测技术无法跟进辣椒转基因技术的发展，既不利于转基因物种监管，也不利于避免国际贸易中设置的技术壁垒。