[发明专利]一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法

说明书

本发明涉及干细胞领域，提供一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法，用于解决干细胞向心肌细胞分化时分化率低的问题。本发明提供的一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法，取自体干细胞制成单细胞悬液，制备拟胚体；将制备好的拟胚体转移到明胶包被的孔板，每孔一个拟胚体添加诱导分化培养基，进行干预分化培养；所述诱导分化培养基中包括丹酚酸B 0.7~1.2mg/L、人参皂苷0.5~1.5mg/mL、淫羊藿苷0.8~1.2mg/L。可以得到足量且可以有效提高细胞移植疗法成功率的心肌细胞。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法。

背景技术

由心肌细胞功能障碍引起的心脏衰竭是世界范围内的一种主要的疾病，心衰患者死亡的主要原因是心脏泵血功能丧失或心率不齐。严重的心衰患者一年期死亡率超过50%。虽然晚期患者可以进行心脏移植，然后由于供体器官一直处于严重的供不应求的状态。由于心力衰竭的高发病率和死亡率、移植心脏的死亡、免疫排斥反应等并发症以及移植心脏后期失效等客观现状，亟待发展新的治疗方法以提高心肌细胞的功能，阻止心力衰竭的发生。目前对心力衰竭的治疗方法主要集中于早期血管再生和抑制进一步的心肌细胞损失，而心肌细胞是一种终端分化的细胞，增殖能力极其有限，损失后极难恢复。

心肌细胞移植疗法着重于重建心肌功能，恢复再生心肌组织的泵血能力，也有研究发现注入心脏的心肌细胞能够形成新的心肌组织。但细胞移植治疗关键因素是确定合适的供体细胞类型。因此，如何诱导干细胞定向分化为心肌细胞，并如何提高干细胞向心肌细胞的分化率是用于医药治疗是亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明解决的技术问题为干细胞向心肌细胞分化时分化率低的问题，提供一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种干细胞体外诱导培育心肌细胞的方法，S11.取自体干细胞制成单细胞悬液；S12.将单细胞悬液细胞计数后用分化培养基将其稀释成细胞浓度为10^-5~10^-3cells/mL的干细胞悬液，接种于细菌培养皿的盖子内表面上，翻转培养皿盖子，使盖子上的干细胞形成悬滴，培养皿中加入水或水溶液以保持悬滴在孵育过程中的湿度，培养皿置于5%CO₂、37℃培养箱中培养1~3天；S13.收集培养皿盖子上悬滴中形成的拟胚体，将其转移到盛有分化培养基的细菌培养皿中，放入培养箱中继续悬浮，促使拟胚体进一步增殖；S14.将制备好的拟胚体转移到明胶包被的孔板，每孔一个拟胚体添加诱导分化培养基，进行干预分化培养；所述诱导分化培养基中包括丹酚酸B 0.7~1.2mg/L、人参皂苷0.5~1.5mg/mL、淫羊藿苷0.8~1.2mg/L。

将自体干细胞诱导分化为心肌细胞，将得到的心肌细胞作为心肌细胞移植疗法的细胞供体可以降低原有细胞对移植的心肌细胞的排斥反应，提高心肌细胞移植的成功率；利用丹酚酸B、人参皂苷和淫羊藿苷诱导干细胞转变为心肌细胞，可以提高干细胞转化为心肌细胞的分化率。

自体干细胞经丹酚酸B、人参皂苷和淫羊藿苷的混合物在培养基中诱导分化，可以得到足量且可以有效提高细胞移植疗法成功率的心肌细胞。

优选地，所述诱导分化培养基中还包括GMEM培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、50mmol/L的丙酮酸钠水溶液和0.1mol/L的二巯基乙醇水溶液，所述GMEM培养基：胎牛血清：非必需氨基酸：50mmol/L的丙酮酸钠水溶液：0.1mol/L的二巯基乙醇水溶液=73.5:24:1:1.3:0.2。通过优化培养基中各主要物质的含量，可以提高干细胞分化为心肌细胞的分化率。