[发明专利]一种生物复合保鲜剂、其制备方法及其在鲟鱼鱼糜制品中的应用

权利要求书

1.一种生物复合保鲜剂，其特征在于，所述的生物复合保鲜剂以溶液的形式存在，溶剂为超纯水，溶液中没食子酸癸醇酯浓度为0.1～0.2 mg/L，双歧杆菌细菌素S浓度为0.05mg/L～0.15 mg/L，山竹皮提取物的浓度为1 mg/L～3 mg/L；

所述没食子酸癸醇酯的制备方法如下：

没食子酸与正癸醇摩尔比为2:4～6，利用脂肪酶作为酶促反应催化剂，浓度为8wt%，叔丁醇作为反应介质，在50 ^oC温度条件下反应13 h，利用层析柱进一步纯化，制备的产物即为没食子酸癸醇酯；

所述的山竹皮提取物利用深度共熔溶剂及超声法获取；

所述的双歧杆菌细菌素S的制备步骤如下：

将37 ^oC条件下于MRS-C肉汤中生长28 h的双歧杆菌培养液加热至80 ^oC保持30 min以杀死细胞并通过灭活蛋白水解酶防止细菌素降解，冷却至室温后，用无菌1 M NaOH将培养基调节至pH 8.0，并在4 ^oC下搅拌过夜，以促进细菌素分子在生产细胞表面上的吸附；通过离心获得目标细胞，用PBS缓冲液洗涤三次，然后悬浮在0.1 mM NaCl中以从生产细胞中解吸细菌素分子，其中0.1 mM NaCl的pH值为3.0；将细胞悬浮液在4 ^oC下搅拌过夜；使用1.0kDa截留膜将上清液在4 ^oC下透析24 h后获得双歧杆菌细菌素S。

2.根据权利要求1所述的生物复合保鲜剂，其特征在于，所述没食子酸癸醇酯浓度为0.2 mg/L，双歧杆菌细菌素S浓度为0.15 mg/L，山竹皮提取物的浓度为3 mg/L。

3.一种如权利要求1～2任一项所述的生物复合保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 利用酶促法制备没食子酸癸醇酯：

没食子酸与正癸醇摩尔比为2:4～6，利用脂肪酶作为酶促反应催化剂，浓度为8wt%，叔丁醇作为反应介质，在50 ^oC温度条件下反应13 h，利用层析柱进一步纯化，制备的产物即为没食子酸癸醇酯；

S2. 利用生物法制备双歧杆菌细菌素S：

将37 ^oC条件下于MRS-C肉汤中生长28 h的双歧杆菌培养液加热至80 ^oC保持30 min以杀死细胞并通过灭活蛋白水解酶防止细菌素降解，冷却至室温后，用无菌1 M NaOH将培养基调节至pH 8.0，并在4 ^oC下搅拌过夜，以促进细菌素分子在生产细胞表面上的吸附；通过离心获得目标细胞，用PBS缓冲液洗涤三次，然后悬浮在0.1 mM NaCl中以从生产细胞中解吸细菌素分子，其中0.1 mM NaCl的pH值为3.0；将细胞悬浮液在4 ^oC下搅拌过夜；使用1.0kDa截留膜将上清液在4 ^oC下透析24 h后获得双歧杆菌细菌素S；

S3. 利用深度共熔溶剂及超声法获取山竹皮提取物；

S4. 将没食子酸癸醇酯、双歧杆菌细菌素S和山竹皮提取物溶解于超纯水，得到生物复合保鲜剂。

4.根据权利要求3所述的生物复合保鲜剂的制备方法，其特征在于，所述的深度共熔溶剂及超声法获取山竹皮提取物的步骤如下：

根据预定的摩尔比，氯化胆碱：乙二醇为1:2，配制混合物；在恒定搅拌下将混合物置于80 ^oC的加盖烧瓶中，直至获得均匀的无色液体即为深度共熔溶剂；将深度共熔溶剂与25%的水混合，将碾碎的山竹皮置于混合液中，并在50 ^oC下进行60 min的提取，即可得山竹皮提取物。

5.根据权利要求3所述的生物复合保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，先将没食子酸癸醇酯溶解于乙醇，超声加速溶解，再溶于超纯水。

6.根据权利要求5所述的生物复合保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，超声辅助条件为：150 W、40 KHz。

7.一种如权利要求1~2任一项所述的生物复合保鲜剂的应用，其特征在于，所述的生物复合保鲜剂用于鲟鱼鱼糜制品的保鲜。