[发明专利]一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用及对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法

说明书

本发明提供一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用，胰腺癌药物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。一种抗胰腺癌的药品组合物，药品组合物含有依帕司他。所述药品组合物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。本发明的实施例还提供一种依帕司他对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法，包括以下过程：利用低温超速离心法提取细胞上清外泌体；将收集的外泌体裂解后用BCA试剂盒定量蛋白，用测得的蛋白量来反映外泌体的量；透射电镜验证外泌体的双层脂质膜包裹的杯状结构；蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝检测外泌体蛋白浓度。本发明中提供了依帕司他有一个新的用途，即抑制外泌体分泌，依帕司他在临床肿瘤治疗中有巨大的应用潜力。

技术领域

本发明属于依帕司他的应用技术领域，具体涉及一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用及对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法。

背景技术

特殊的肿瘤微环境在胰腺癌的发生、发展、转移及耐药中发挥了关键作用。胰腺癌通过分泌外泌体来塑造自身及其它器官的微环境来帮助其进展。与正常细胞和其他肿瘤相比，胰腺癌细胞分泌的外泌体更多，且高度恶性的胰腺癌细胞可通过外泌体将其癌性特征转移至低度恶性的癌细胞，促进其增殖、迁移和侵袭以加速疾病进展。胰腺癌来源的外泌体也能够被肝脏中的Kupffer细胞摄取，引起Kupffer细胞分泌TGFβ，进而促进了肝星状细胞产生纤连蛋白，营造一个适宜肿瘤生长的微环境从而促进肝转移。由此可见，寻找有效的抑制外泌体分泌手段对于胰腺癌的临床治疗具有重要意义。

目前，中性Smase(鞘磷脂酶)的非竞争性抑制剂GW4869基本上是公认的外泌体抑制剂，可以抑制外泌体的分泌。并且有研究发现在前列腺癌细胞中，法尼基转移酶抑制剂(Manumycin A)通过抑制Ras信号通路和hnRNP H1的表达来抑制外泌体的生成和分泌。虽然这些药物都可以抑制外泌体生成释放，但都尚未开展临床试验，且一个新药的开发需要承担高额的投入和未知的风险。因此如何寻找一种老药的新用途已成为目前需要解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用及对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法，已解决背景技术中所提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用。

进一步的，所述胰腺癌药物应用于抑制胰腺癌细胞外泌体的分泌。

本发明的实施例提供一种抗胰腺癌的药品组合物，其特征在于，所述药品组合物含有依帕司他。

进一步的，所述药品组合物应用于抑制胰腺癌细胞外泌体的分泌。

本发明的实施例还提供一种依帕司他对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法，其特征在于，包括以下过程：(1)建立依帕司他处理后胰腺癌细胞组和对照胰腺癌细胞组，利用低温超速离心法提取细胞上清外泌体；(2) 将收集的外泌体裂解后用BCA试剂盒定量蛋白，用测得的蛋白量来反映外泌体的量；(3)透射电镜验证外泌体的双层脂质膜包裹的杯状结构；(4)蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝检测外泌体蛋白浓度。

进一步的，所述步骤(1)具体包括以下过程：将依帕司他处理后胰腺癌细胞组和对照胰腺癌细胞组在细胞数量相同的标准下留取细胞上清液80ml，在4℃经300×g离心15min，2,000×g离心30min，16,500×g离心30min 后去沉淀，所得上清液经过0.22μm滤嘴过滤再150,000×g低温超速离心 120min，收集沉淀重悬于100ul PBS中，-80℃分装保存。

进一步的，所述步骤(2)具体包括以下过程：取10μL收集的外泌体用 2.5％的戊二醛固定2h，PBS洗涤外泌体并重悬于100μL PBS中，取20ul滴于小铜片上，3％磷钨酸水溶负染1min，透射电镜观察。