[发明专利]鉴别绵羊FecB基因SNP基因型的引物及方法有效
| 申请号： | 201910308089.0 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN109837352B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 郭梁;李春冬;徐伟良;郭元晟;雅梅;钱俊平 | 申请（专利权）人： | 锡林郭勒职业学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/683;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 李鹏 |
| 地址： | 026000 内蒙古自治*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 绵羊 fecb 基因 snp 基因型 引物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.基于PCR-RFLP鉴别绵羊FecB基因SNP基因型的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）利用CTAB法提取待鉴别的绵羊基因组DNA；
（2）利用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对步骤（1）提取的DNA进行PCR扩增；
（3）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；
（4）利用AvaII 限制性内切酶对所回收的条带进行酶切；
（5）对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析：若得到220bp的酶切条带，则待鉴别的绵羊FecB基因SNP基因型为SNP-A，若得到170bp的酶切条带，则待鉴别的绵羊FecB基因SNP基因型为SNP-G，若同时得到220bp和170bp的酶切条带，则待鉴别的绵羊FecB基因SNP基因型为SNP-A/G；
步骤（2）中，PCR反应体系为：PCR SuperMix 10 μL，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的引物各1 μL，DNA 1μL，灭菌的去离子水7μL；PCR扩增参数：预变性94℃，5 min，1循环；变性94℃，30 s，退火61℃，30s，延伸72℃，60 s，40循环；72℃，10 min，1循环；步骤（4）中，酶切温度37℃，时间4.5 h。
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