[发明专利]用于检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用。本发明建立了一种基于VP0重组蛋白检测1型和3型DHAV血清抗体的通用型间接ELISA检测方法，该方法是以原核表达的1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原，经Western blotting和间接ELSIA方法证实该VP0重组蛋白即可以与1型DHAV血清抗体发生特异性反应，也能与3型DHAV血清抗体发生特异性反应，因此以1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测可判断被检鸭血清是否含有1型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体及其抗体水平，本发明的提出为有效防治鸭甲型肝炎提供了新的快速检测手段。

技术领域

本发明特别涉及一种基于1型鸭甲型肝炎病毒VP0蛋白的，可用于检测1 型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用。本发明属于生物检测技术领域。

背景技术

鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis,DVH)是由鸭甲型肝炎病毒(DuckHepatitis A Virus,DHAV)和鸭星状病毒(Duck astrovirus,DAstV)引起的雏鸭的一种传播迅速、高度致死的病毒性疾病。鸭甲型肝炎病毒属于小RNA病毒科禽肝病毒属成员，其成员按照基因型分为A、B、C型分别对应传统的DHV-1、台湾新型和韩国新型，此三型也称为鸭甲型肝炎病毒1型(DHV-1)，2型(DHV-2) 和3型(DHV-3)，各型间无交叉保护或弱交叉保护。鸭星状病毒属于星状病毒科禽星状病毒属成员，与鸭甲型肝炎病毒无血清型交叉反应。我国以鸭甲型肝炎病毒的发生最为严重，主要流行的为1型和3型DHAV，且生产实践中常发生1型和3型DHAV的混合感染，除台湾地区外，内陆尚未见DHAV-2的报道。随着养鸭业不断向产业化、集约化和规模化方向发展，许多地区所进行的传统鸭肝炎的主动免疫和被动免疫失败现象频繁发生，对鸭肝炎的防控提出了新的挑战。目前1 型DHAV疫苗已获得批准文号，3型DHAV-3疫苗尚在研制中。鉴于当前DHAV-1 和DHAV-3的危害日趋严重，多价苗的开发迫在眉睫。

为了能有效防控鸭甲型肝炎在我国的流行，对疫情进行实时监测和及时接种疫苗显得尤为重要。目前，对于鸭甲型肝炎的血清学检测方法主要采用的是血清中和试验，但是该方法存在检测周期长、重复性较差的缺点，不适合进行快速检测，因此急需一种更为简洁、可靠的鸭肝炎抗体检测技术。基于全病毒建立的 ELISA方法因DHV纯化比较困难限制了该方法的推广使用，已报道的利用大肠杆菌表达的主要抗原蛋白建立的ELISA方法都是针对其中一个型的DHAV，在用于多价苗评价及临床混合感染血清抗体检测时，需要分别进行DHAV-1和DHAV-3 血清抗体的检测，操作繁琐且成本翻倍。目前鲜有针对鸭甲型肝炎病毒我国主要流行株1型和3型DHAV血清抗体通用型ELISA检测方法的报道。在小RNA病毒中，VP0蛋白作为主要的宿主保护蛋白，编码主要的抗原位点并具有主要的型特异性位点，是决定病毒抗原性的主要成分。因此，利用基因工程技术研制开发适用于1型和3型DHAV血清抗体检测的特异的、敏感的、适合基层应用的通用型ELISA检测方法，对于我国当前鸭甲型肝炎病毒的快速诊断和有效防控具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是克服传统鸭甲型肝炎病毒血清抗体检测手段的不足，即不能一次性全面检测鸭血清中I型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体水平，提供了一种可检测I型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体水平的通用型间接ELSIA检测方法及试剂盒。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明以原核表达的1型和3型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原，经Westernblotting和间接ELSIA方法证实1型DHAV VP0重组蛋白即可以与1型DHAV血清抗体发生特异性反应，也能与3型DHAV血清抗体发生特异性反应，且 DHAV-1-VP0重组蛋白作为包被抗原与3型血清抗体反应的强度强于 DHAV-3-VP0重组蛋白作为包被抗原与1型血清抗体反应的强度。因此以1型 DHAV VP0重组蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测可判断被检鸭血清是否含有1型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体及其抗体水平。