[发明专利]一种结核病的免疫标志物及应用

说明书

本发明涉及一种结核病的免疫标志物：IFNγ、GZMA双阳性的CD4T细胞。本发明还提供了上述免疫标志物在制备潜伏性结核和活动性结核鉴别诊断和/或疗效预后监测试剂盒中的应用以及一种试剂盒。试剂盒的核心成分为下述三种物质的组合：检测CD4的物质、检测IFNγ的物质和检测GZMA的物质。将含有淋巴细胞的体液样本(含外周血液样本)，经过结核菌特异性抗原刺激后，采用流式细胞术及其类似方法检测其中的IFNγ+GZMA+双阳性CD4T细胞含量，从而应用于活动性结核病包括肺结核和肺外结核的筛查或诊断、疗效评价、预后复发风险评估相关产品的制备中，具有优良的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物标志物技术领域，具体地说，是一种结核病的免疫标志物及应用。

背景技术

结核病是严重威胁人类健康的传染性疾病，据世界卫生组织(WHO)估计，全球约有1/3的人口感染结核菌，每年新发病800万～1000万人，每年约有200万人死于结核病，是其它所有传染病死亡人数的总和。我国的结核病流行疫情非常严峻，每年新发病例约100万，是致死性排行第一的感染性疾病。结核病流行现状有多方面的原因，其中缺乏特异、有效的活动性结核病诊断技术是重要原因。

目前结核病诊断主要有影像学诊断、结核菌及其分子生物学诊断和免疫学诊断等方法。影像学诊断难以区分肺结核病和其他肺部疾病；结核菌诊断则包括痰涂片抗酸染色、痰培养、结核菌DNA或RNAPCR扩增等，但由于有效标本采集的困难，尤其对于儿童结核、肺外结核等，假阴性高，易形成漏诊；免疫学诊断主要分抗体检测和细胞免疫检测，血清学检测特异性低；PPD皮试是目前最常用的结核菌感染的细胞免疫检查方法，无法区分BCG接种和结核菌感染，IGRA是目前最好的细胞免疫学检测，但是无法有效区分活动性结核病和潜伏感染。因此研制特异有效的活动性结核病诊断试剂对结核病防治具有重要意义。

结核的免疫学诊断技术是基于检测外周血在结核抗原刺激下血清或免疫细胞γ干扰素(IFNγ)的释放，目前有两种体外IGRA结核诊断试剂被美国FDA批准，TB Gold In-Tube test(QFT–GIT，)和T–Spot(TB test)，QFT–GIT测定原理是采用结核抗原(如结核特异性蛋白ESAT-6、CFP-10、TB7.7等)刺激外周血，并采用ELISA方法测定血清中IFNγ的释放含量，而T–Spot则是刺激后采用ELI-SPOT等方法测定IFNγ单独阳性免疫细胞数量，通过设定特定的阈值，可以判断患者是否曾经或当前感染过结核菌，但这两种方法试剂均无法有效区分活动性结核病和潜伏结核感染。