[发明专利]过表达碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因的工程菌及其构建方法

说明书

过表达碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因的工程菌及其构建方法。过表达碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因ccpN利用PCR扩增克隆多糖絮凝剂合成途径获得，核苷酸序列如SEQ ID No1。利用PCR扩增克隆碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因ccpN，将基因ccpN片段连接到表达载体上，导入地衣芽孢杆菌中，通过四环素抗性筛选获得目的基因的工程菌。构建方法：设计PCR引物；将目的基因插入到PHY300PLK‑PamyL‑TTamyL组成型启动子PamyL下游多克隆位点，得过表达质粒，导入到E.coli DH5α中扩增；将过表达质粒电转化地衣芽孢杆菌，筛选转化子，验证得地衣芽孢杆菌重组菌。

技术领域

本发明涉及基因工程及微生物发酵工程，尤其是涉及过表达碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因的工程菌及其构建方法。

背景技术

细菌在多种碳源共存的环境中优先利用一种(通常是葡萄糖)的现象被称为分解代谢产物阻遏效应(CCR)。碳控制蛋白CcpN是细胞中碳代谢的一个中心调控蛋白，主要通过抑制糖异生基因(gapB、pckA)和甘油降解途径(glpFK、glpD)调节中央碳代谢(Bioscience,biotechnology,and biochemistry,2009,73(2):245-259；Journal of Biotechnology,2002,184(15):4288-4295)。其也是革兰氏阳性菌，特别是芽孢杆菌属碳分解代谢物阻遏的转录抑制因子，在糖酵解和糖异构条件下都起代谢作用，但在糖酵解过程中其作为阻遏物的作用更明显(Molecular Microbiology,2005,55(5):1435-1451)。

当培养基中存在葡萄糖时，CcpN的表达量急剧增加，糖酵解途径增强，柠檬酸循环受抑制，甘油代谢途径的碳代谢流被切断，加快菌体生长，碳通量重新分配到多糖产生途径，使菌体从合成γ-PGA的代谢模式转向分泌多糖絮凝剂，有利于多糖的合成；当葡萄糖耗尽，CcpN表达量下调，甘油代谢的抑制作用被解除，甘油的消耗速率开始加快，有利于γ-PGA的生物合成。