[发明专利]一种基于脂质体的活性小分子控释方法及其应用

说明书

本发明公开一种基于脂质体的活性小分子控释方法及其应用，采用薄膜分散法制备包载活性小分子的脂质体，包括以下步骤：(1)将活性小分子和脂类溶于甲醇和氯仿的混合物中(1:1，v/v)；(2)采用旋转真空蒸发仪除去甲醇和氯仿，之后用水化液水化脂质膜；水浴超声，获得包载活性小分子的脂质体，通过多孔聚碳酸酯膜挤压；透析过夜；(3)将多巴胺溶液加入到生物材料中，轻轻摇匀过夜；在无菌蒸馏水中进行超声清洗；(4)加入载有活性小分子的脂质体静置反应；再用无菌磷酸盐缓冲液清洗后即可获得活性小分子的脂质体修饰的培养板表面。该方法将活性小分子脂质体共价接枝在聚苯乙烯表面，使脂质体作为药物递送载体实现药物的可控释放。

技术领域

本发明涉及一种基于脂质体的活性小分子控释方法及其应用，属于药物控制释放和生物材料技术领域。

背景技术

脂质体结构上自我封闭，能够分别或者同时包载水溶性和脂溶性物质(脂溶性分子包载在脂质体双层膜中间，水溶性分子包载在脂质体最内部)，并可防止药物降解，因此广泛用于控制药物的装载、传递和释放。目前，脂质体药物递送系统主要有四种类型，包括传统的脂质体、空间稳定的脂质体、配体靶向的脂质体以及诊疗性脂质体。作为一种成熟的保护和递送药物的载体，游离脂质体已被广泛用于将药物输送到肿瘤等病理部位和炎症/感染区域；此外，脂质体作为基因传递的载体也被广泛研究。脂质体作为药物载体具有良好的生物相容性，可以在体内实现药物的被动靶向和主动靶向；局部使用载药脂质体可提高损伤部位的药物浓度，提高药物吸收及作用效果，减少药物使用剂量从而避免与过量药物剂量相关的不良毒副作用；载药脂质体还可以控制药物在体内的分布和清除率。

那么，是否可以将载药脂质体共价修饰于固体基底表面，进一步拓宽脂质体的应用范围呢？Dimitrievski和Kasemo分析了脂质囊泡在固体基底表面存在的三种可能方式，并指出其在固体表面的存在方式取决于脂质的组分(如不同电荷或中性脂质的混合)、水化液的特性(如pH、离子类型、浓度等)和固体材料表面的特性(如电荷密度)。Mourtas等利用两步酰胺键形成法将脂质体共价固定于等离子体处理后的金属表面，在确保脂质体于金属表面保持完整的条件下，对不同的脂质体附着条件进行了评价及优化。López-Noriega等制备了一种可控释药物的功能化胶原/HA支架，该支架由热敏脂质体包载PTHrP 107-111(一种进入细胞内发挥促成骨和抗破骨活性的五肽)共价修饰于表面组成。

研究结果表明，应用外部热刺激(42℃，20min)可以改变药物从支架释放的动力学，随着PTHrP 107-111的释放，支架表现出明显的促成骨分化作用。Monteiro等提出将包载庆大霉素的脂质体共价接枝在壳聚糖纳米纤维表面；该表面在24h内可持续释放庆大霉素；体外抑菌实验证实，纳米纤维表面脂质体释放的庆大霉素对大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌具有杀菌活性。Mourtas等使用脂质体包载妥布霉素并将其共价修饰于不锈钢表面，体外研究发现该表面的抗菌活性增强。使用包载抗菌药物的脂质体进行材料表面改性的优点包括：有助于减少药物使用剂量，降低药物毒副作用；降低耐药性；保护药物的生物活性；有效地控制药物释放等。De Leo等指出，利用脂质体共价修饰钛表面的优势是可以将极性不同的药物(如抗生素、消炎药等)、蛋白质(如生长因子、成骨多肽等)和其他治疗制剂以有效和持续的浓度直接递送到目标组织，这对于进入细胞内起作用的物质尤为重要。综上所述，使用载药脂质体共价修饰固体基底是一种极具应用前景的方法。

聚多巴胺(pDA)涂层作为一种易于操作的表面改性方法，近年来引起了广泛的关注。通过在弱碱性水环境中简单浸泡方式，多巴胺几乎可以在所有材料表面(无需预处理)形成结构稳定的pDA薄膜；而且，pDA的邻苯二酚结构可以进一步连接含氨基或巯基的生物活性分子，进而实现材料表面的二次修饰；该方法已被广泛用于各种生物材料的功能化。不同的功能组分(如生物大分子、长链分子和金属膜等)通过引入pDA可以赋予基底材料表面不同的功能。因此，利用pDA的通用附着力和高反应活性，可方便地在各种材料表面引入多功能涂层。