[发明专利]甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂抗性突变体的应用及其方法

权利要求书

1.甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂抗性突变体的应用，其特征在于，以甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂抗性突变体5N为供体，以“沪油15”为轮回亲本，通过杂交、多次回交和自交，最终获得BC₄F₂，在每个后代群体中都通过喷施磺酰脲类除草剂筛选抗性单株，通过PCR检测SNP位点进行前景选择，并利用SSR标记筛选背景回复率趋近“沪油15”的植株，最终获得遗传背景回复率高于96％的具有“沪油15”优良农艺性状的抗除草剂油菜新品系。

2.利用甘蓝型油菜抗除草剂突变体选育抗除草剂油菜的方法，包括以下步骤：

a)以甘蓝型油菜抗除草剂突变体材料5N为母本，以甘蓝型油菜“沪油15”为父本杂交，F₁代全部为抗性株R1r1R3r3，以F₁代植株为母本，与“沪油15”回交获得BC₁F₁代群体，BC₁F₁群体中分离出1：1：1：1的敏感型植株r1r1r3r3、抗性植株R1r1r3r3、抗性植株r1r1R3r3和高抗性植株R1r1R3r3，通过在油菜四叶期喷施磺酰脲类除草剂，除去敏感型植株，并提取抗性株叶片DNA，通过PCR检测SNP位点鉴定得到R1r1R3r3抗性植株；

b)以步骤a)中的杂合抗性株R1r1R3r3为母本，继续与“沪油15”回交，获得BC₂F₁回交群体，通过喷施磺酰脲类除草剂，通过PCR检测SNP位点进行前景选择，并利用SSR标记筛选背景回复率趋近“沪油15”基因型为R1r1R3r3的抗性株，该种基因型植株占整个BC₂F₁群体的1/4，将该类型抗性株继续与“沪油15”进行连续回交至获得BC₄F₁群体；

从BC₄F₁群体中挑选背景回复率高于96％并具有磺酰脲类除草剂抗性且基因型为R1r1R3r3的株系，对这些植株进行套袋自交获得BC₄F₂代群体，喷施除草剂，通过PCR检测SNP位点进行前景选择，从BC₄F₂中挑选基因型为R1R1R3R3的抗性植株，该类型植株占整个BC₄F₂群体植株数量的1/16，利用SSR标记进行背景选择，筛选出背景回复率高于96％的基因型为R1R1R3R3的抗性植株，即为选育出的抗除草剂油菜。

3.根据权利要求2所述利用甘蓝型油菜抗除草剂突变体选育抗除草剂油菜的方法，其特征在于，在每一步骤中获得杂交后代之后通过喷施磺酰脲类除草剂和PCR检测SNP位点进行前景选择，筛选出抗除草剂的植株，接着利用SSR标记进行背景选择，筛选出背景回复率趋近“沪油15”基因型为R1r1R3r3的抗性株。

4.根据权利要求2所述利用甘蓝型油菜抗除草剂突变体选育抗除草剂油菜的方法，其特征在于，步骤a)中，获得四种基因型的BC₁F₁回交群体后，在油菜四叶期喷施目标除草剂，除去敏感型植株r1r1r3r3，之后通过PCR检测SNP标记筛选基因型为R1r1R3r3的高抗性植株，接着利用SSR标记进行背景选择，筛选出背景回复率趋近“沪油15”基因型为R1r1R3r3的抗性株。

5.根据权利要求3所述利用甘蓝型油菜抗除草剂突变体选育抗除草剂油菜的方法，其特征在于，所述甘蓝型油菜抗除草剂突变体材料5N中，ALS1和ALS3两个基因均发生单位点突变，其中，在ALS1基因的编码序列中，第1676位碱基由G突变为T，具体核苷酸序列如SEQID NO.1所示；在ALS3基因的编码序列中，第1667位碱基由G突变为T，具体核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

6.根据权利要求4所述利用甘蓝型油菜抗除草剂突变体选育抗除草剂油菜的方法，其特征在于，通过PCR检测SNP位点时有两对引物，分别用于扩增ALS1和ALS3基因，两对引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。