[发明专利]一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法

权利要求书

1.一种预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离；

(2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品；

(3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱-质谱联用法测试分析O²-POB-dT含量；

(4)根据肝脏组织中O²-POB-dT含量确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。

2.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的水解是在酸溶液中水解。

3.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的孵育是在80℃水浴中孵育30min。

4.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的固液分离是使用0.22μm的有机相针式滤膜过滤。

5.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：还包括如下步骤：测定动物血液样品中NNN的α-羟基化途径代谢产物的含量，计算α-羟基化系数，并结合动物肝脏中O²-POB-dT含量，确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。

6.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述过固相萃取柱的上样速度为1～2mL/min。

7.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(2)所述的洗脱溶剂为甲醇或甲醇水溶液。

8.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述液相色谱的条件为：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱；柱温50℃；流动相A为体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈，二者体积比为32：68；等度洗脱，流速0.25mL/min；进样量10μL。

9.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述质谱的条件为：电加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS²，一级全扫描分辨率为70000，范围为100～400m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，AGC为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。

10.一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离；

(2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品；

(3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱-质谱联用法测试分析O²-POB-dT含量。