[发明专利]基于磁性分离和DNA自组装的肿瘤外泌体纳米荧光传感器

说明书

本发明提供一种基于磁性分离和DNA自组装的肿瘤外泌体纳米荧光传感器，包括偶联GPC‑1抗体的功能化磁珠、触发链、三个茎环状核酸探针。本发明实现了乳腺癌GPC‑1(+)外泌体亚群的定量检测，检测特异性高、灵敏度高、检测范围宽，通过对临床血浆来源标本中的乳腺癌GPC‑1(+)外泌体亚型进行检测以评估该方法的临床应用价值，该方法具有普适性，可运用于其它已筛出特异核酸适体的生物标志物。可用于其它外泌体亚型、蛋白、细胞和金属离子等的检测。

技术领域

本发明涉及肿瘤液体检测技术领域，特别是涉及一种基于磁性分离和DNA自组装的肿瘤外泌体纳米荧光传感器。

背景技术

乳腺癌是全球最常见的女性恶性肿瘤。2015年中国癌症统计数据显示：近十年，中国乳腺癌患者占所有女性癌症患者的15％，且死亡率有明显上升趋势，是45岁以下女性最常见的癌症死因。早期发现、早期诊断是改善乳腺癌患者预后、提高生存率的重要手段。目前乳腺癌早期筛查措施包括：乳腺X线、乳腺超声、乳腺核磁共振、临床体检和自检；诊断措施包括：细胞学检查、病理活检，正电子发射计算机断层显像(Pet-CT)。以上筛查或诊断措施不同程度存在灵敏度低、特异性差、有创、有放射性、检查周期长等缺点，因此建立敏感、特异、无创、便捷、快速的替代检测方法用于早期乳腺癌的筛查、诊断或监测，对控制乳腺癌发展和提高患者生存质量显得尤为重要。

液体活检有着迅速、便捷、损伤性小等众多优点，在大幅度缩短癌症确诊时间的同时，可对癌症患者的治疗情况进行随时监测，有望成为乳腺癌筛查、诊断或监测的理想方法。最新研究发现外泌体与乳腺癌的发生、发展、转移以及抗药性具有一定的相关性，被认为是具有广泛应用前景的乳腺癌液体活检生物标志物。

目前外泌体的实验室检测主要包括分离和分析两大步骤。外泌体分离方法金标准是超速离心法，耗时长、需要昂贵的实验设备、所需标本量大(＞2mL)等缺点限制了其临床应用；已出现的商业化外泌体分离沉淀试剂盒耗时较短、所需标本量小，但分离纯度有限，且试剂明显影响外泌体的生物活性。而目前外泌体分析的主流方法：纳米粒子跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)和电镜仅可提供外泌体的大小、浓度、形态等参数，不能确定外泌体来源；其它如ELISA或Western blot检测外泌体蛋白等方法，由于需要样本量较大，操作步骤繁琐，同样不适用于临床检测。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基于磁性分离和DNA自组装的肿瘤外泌体纳米荧光传感器，用于解决现有技术中外泌体的检测方法操作繁琐、所需样本量大、不适用于临床检测等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种用于肿瘤外泌体检测的试剂盒，包括偶联有抗体的功能化磁珠、触发链、三个茎环状核酸探针。

可选地，所述触发链包括用于与标志物互补结合的识别区、用于与所述三个茎环状核酸探针互补结合的触发区。

可选地，所述触发区含有如下核苷酸序列：GCACTACTCCCTAACATCTCAAGC。

可选地，所述偶联有抗体的功能化磁珠选自偶联GPC-1抗体的功能化磁珠。

可选地，所述触发链的识别区含有如下核苷酸序列： CACCCCACCTCGCTCCCGTGACACTAATGCTA。

可选地，所述偶联GPC-1抗体的功能化磁珠可以从是市场上购买链霉亲和素化磁珠和 GPC-1抗体，自行包被得到，针对不同的标志物，磁珠上可以偶联不同的抗体。

可选地，所述触发链选自CD63aptamer-ssDNA，所述CD63aptamer-ssDNA含有如SEQID NO.1所示的核苷酸序列。