[发明专利]一种雪蚤抗冻蛋白SF-P的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201910292940.5 | 申请日： | 2019-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN110055257B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 吴金鸿;吴乔羽;杨丹璐;于颖;顾欣哲;龚盛祥;汪少芸;王正武 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C07K14/435;C12N15/70;A23L3/3526;C12N1/04;A01N1/02 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 雪蚤抗冻 蛋白 sf 制备 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组雪蚤抗冻肽SF-P的制备方法制备的重组雪蚤抗冻肽在生物和食品抗冻保存中的应用，所述抗冻中的应用具体为菌体冻存中的保证菌体的活力，所述菌体为嗜热链球菌；所述重组雪蚤抗冻肽SF-P采用以下方法制备得到：
步骤一：将人工合成的抗冻肽编码基因构建于克隆载体上；其中，所述克隆载体包括标签序列，所述标签序列如SEQ ID NO.1所示；合成的抗冻肽编码基因长度为252bp，其基因序列如SEQ ID NO.2所示。
步骤二：将含有所述抗冻肽编码基因的重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中，进行蛋白表达；
步骤三：用亲和层析法对表达蛋白进行纯化；
步骤四：使用蛋白酶切开纯化蛋白标签，获得所述抗冻肽。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤一中，所述克隆载体为PET28a-sumo载体。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤二中，所述大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤三中，所述亲和层析法中所用层析柱为镍柱。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤四中，所述蛋白酶为sumo蛋白酶，所述标签为His-sumo标签。
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