[发明专利]小分子DNA纯化试剂

说明书

本发明公开了一种小分子DNA纯化试剂，由试剂A和试剂B两种独立的试剂构成，其中，其中试剂A为饱和碘化钠水溶液(pH 6.0)，且其中含有0.5％质量浓度的Na₂SO₃，试剂B为DNA洗涤液，配方为20mM pH 7.2的Tris.HCl、50mM KCl、85％乙醇。本发明的DNA纯化试剂可同时替代PCR产物纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒中的试剂纯化DNA或从琼脂糖凝胶中抽提DNA,特别是对小分子DNA具有很好的纯化效果，具有很大应用价值和市场前景。

技术领域

本发明属于化学试剂领域，具体涉及一种小分子DNA纯化试剂。

背景技术

基因克隆是现代分子生物学中最频繁使用的技术手段之一，广泛应用于农业，医学，生物研究，生物制药等领域。基因克隆是将酶切后的目的基因(或DNA片段)与相同的酶酶切的载体在DNA连接酶的作用下进行连接，然后将重组DNA导入细菌宿主进行复制获得大量重组DNA的过程。这一过程包括一系列的DNA操作技术，其中的关键步骤之一是DNA的纯化,它对基因克隆效率起至关重要的作用。例如，利用聚合酶链式反应(PCR)获得的DNA需要纯化以及酶切后的产物经琼脂糖凝胶电泳后也需要纯化。目前，在研究中，常常利用商业试剂盒如PCR纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒对DNA进行纯化。

PCR纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒常用于分子生物学和基因工程研究领域并加快基因的克隆效率。这些试剂盒被设计和生产成一次性使用的商品，主要原因之一是因为试剂盒中的试剂配方不为用户所知。在现有的技术中，PCR产物纯化和DNA胶抽提是分别利用PCR纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒完成，现有的PCR试剂盒和DNA胶抽提试剂盒纯化小分子DNA效率很低，很难获得足够DNA满足基因克隆的要求，影响研究的效率，浪费时间和人力。PCR纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒包含各自的试剂，是两种不同的试剂盒，购买两种试剂盒不仅增加研究成本，也产生大量实验室垃圾，对环境造成负担。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种小分子DNA纯化试剂，解决现有的PCR纯化试剂盒和DNA胶抽提试剂盒对小分子DNA纯化效率低的问题。

本发明的技术方案为：小分子DNA纯化试剂，由试剂A和试剂B两种独立的试剂构成，其中，其中试剂A为饱和碘化钠水溶液(pH 6.0)，且其中含有0.5％质量浓度的Na₂SO₃，试剂B为DNA洗涤液，配方为20mM pH 7.2的Tris.HCl、50mM KCl、85％乙醇。

进一步地，试剂A的配置方法如下：

(1)在电子天平中称量210克NaI,将称量好的NaI置于500毫升烧杯中；

(2)取100毫升蒸馏水，在50℃水浴锅中加热，加入烧杯中溶解NaI,充分搅拌最大限度的溶解NaI，直至仍有少量NaI固体未还完全溶解，室温静置1小时；

(3)用浓盐酸调整溶液pH值至6.0，静置过夜，将上清转移至无菌试剂瓶中；

(4)加入0.5克亚硫酸钠(Na₂SO₃)固体至溶液中让其充分溶解，防止饱和NaI氧化变色；

(5)将溶液用0.45μM过滤器灭菌并保存在避光的容器中。

进一步地，试剂B的配置方法如下：

(1)按照常规方法配制1M Tris.HCl(pH 7.2)母液；

(2)在电子天平中称量0.373克KCl，置于250毫升试剂瓶中；

(3)向试剂瓶中加2毫升1M Tris.HCl(pH7.2)母液；

(4)向试剂瓶中加13.0毫升蒸馏水将KCl彻底溶解；