[发明专利]一种用于检测转基因植物的探针、表面等离子共振生物传感器及检测转基因植物的方法在审
| 申请号： | 201910290711.X | 申请日： | 2019-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN110093439A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 李亮;金芜军;安娜;宛煜嵩;刘卫晓;郑子繁;温洪涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6818;C12N15/11;C12M1/34;C12M1/00 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 周建秋 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 转基因植物 表面等离子共振生物传感器 检测 检测灵敏度 核苷酸序 灵敏 再生 | ||
1.一种用于检测转基因植物的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为SEQ IDNO：1所示的序列。
2.一种用于检测转基因植物的表面等离子共振生物传感器，其特征在于，所述表面等离子共振生物传感器包括传感芯片，所述传感芯片上偶联有权利要求1所述的探针。
3.根据权利要求2所述的传感器，其中，所述传感芯片表面结合有链霉亲和素；所述探针5’端标记有生物素。
4.根据权利要求2所述的传感器，其中，所述偶联包括如下步骤：将含有所述探针的偶联溶液流经所述芯片，使所述探针与所述芯片表面结合，得到所述表面等离子共振生物传感器。
5.根据权利要求4所述的传感器，其中，所述偶联溶液还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20，所述探针在所述偶联溶液中的浓度为20～50nM，所述偶联的时间为180～300s；所述探针的偶联量为200～400RU。
6.一种检测转基因植物的方法，其特征在于，所述检测的目标基因为CaMV35S启动子，该方法包括如下步骤：
S1，提取待测植物的基因组DNA；
S2，使含有所述基因组DNA的溶液流经所述传感芯片，并检测RU值响应信号；若产生RU值响应信号，则所述待测植物中含有所述目标基因，若未产生RU值响应信号，则所述待测植物中不含有所述目标基因；所述传感芯片为权利要求2～5中任意一项所述的传感器的传感芯片。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤S2中的所述含有所述基因组的溶液为所述基因组DNA与PBSM缓冲液的混合溶液；所述混合溶液流经所述传感芯片的流速为10～30μL/min，时间为120～300s。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述PBSM缓冲液的pH为7.0～8.0，所述PBSM缓冲液含有浓度为125～150mM的NaCl、浓度为2.0～3.0mM的KCl、浓度为10～15mM的Na2HPO4、浓度为1～5mM的KH2PO4、浓度为0.0005～0.001体积％的吐温20和浓度为15～20mM的MgCl2。
9.根据权利要求6所述的方法，其中，该方法还包括在步骤S2之后，将所述传感芯片再生，所述再生的方法包括：使再生试剂与所述传感芯片接触30～60s进行再生处理；所述再生试剂为浓度为10mM～50mM的HCl和/或浓度为10～50mM的NaOH。
10.根据权利要求6所述的方法，其中，所述待测植物包括水稻、玉米、大豆、油菜、棉花及木瓜中的至少一种。
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