[发明专利]一种快速鉴定食品中绵羊源成分的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测食品中绵羊源成分的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）待测样品提取DNA；

（2）以提取DNA为模板，采用基于内标准基因设计的特异性非对称PCR引物组合非限制引物F和限制引物R+poly C进行PCR扩增；

（3）非对称PCR产物与DNA-银纳米簇探针杂交；

（4）结果判断：特异性单链靶标会与探针特异性碱基互补结合并激发探针，其在365 nm下会产生黄色荧光，样品为阳性；

所述内标准基因为SEQ ID NO.1所示的序列；

所述基因的特异性非对称PCR引物，包括以下两条引物，F为非限制引物，R+poly C为限制引物R的5’端连接DNA-银纳米簇激发序列poly G的反向互补序列poly C：

F：AGCTGAACCCTGGAAATCA；

R + poly C：CCCCACCCCACCCCACCCCGAAAGCGACCAGACACTA；

所述DNA-银纳米簇探针，包括DNA成核序列、DNA探针序列、银离子和硼氢化钠，所述DNA成核序列是：CCCCCTTAATCCCCC；所述DNA探针序列是R：CGAAAGCGACCAGACACTA。

2.权利要求1所述的特异性非对称PCR引物组合F和R+poly C在绵羊源成分鉴定中的应用。

3.权利要求1所述的特异性非对称PCR引物组合F和R+poly C在制备绵羊源成分检测试剂盒中的应用。

4.权利要求1所述的一种检测食品中绵羊源成分的快速检测方法在绵羊源成分鉴定中的应用。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述非对称PCR扩增，其25 mL扩增体系的具体配置为：1x PCR buffer，0.4 mM dNTP，0.8μM 引物F，0.08μM 引物R+poly C，1.5U rTaq DNA polymerase。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，非对称PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min；45个循环：95℃ 30min，53℃ 30s， 72℃30s；72℃延伸10min。