[发明专利]用于禽畜的丁酸梭菌复合菌液的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于禽畜的丁酸梭菌复合菌液的制备方法，包括如下制备步骤：A、制作复合菌群原料；B、制作一级液体菌种：（1）配置培养液；（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1‑2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得丁酸梭菌活化扩繁液10‑50ml；混匀菌种，然后培养1‑2.5天，得一级液体菌种；C、制作二级液体菌种，得到复合液体益生菌剂。本发明以研究课题成果为依据，所制备的复合菌液当中含有特定的益生菌群，通过在禽畜身体上喷洒复合液体益生菌剂，即可进行禽畜自身卫生环境的改善和疾病的防治。

技术领域

本发明涉及禽畜养殖技术领域，尤其是一种用于禽畜自身的复合菌液的制备和应用。

背景技术

目前，禽畜人工养殖行业中，禽畜自身卫生环境的改良处理是一个难题。现有技术中，主要通过简单的清水冲洗进行简单的处理，效果较差。而通过药物冲洗又且容易对禽畜本身造成伤害，且效果也不持久。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于禽畜的丁酸梭菌复合菌液的制备方法及相关应用。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。

用于禽畜的丁酸梭菌复合菌液的制备方法，该方法包括如下制备步骤：

A、制作复合菌群原料：

（1）取丁酸梭菌原液在碳源充足的温暖溶液中充分扩繁活化，备用；

（2）同时进行里氏木霉菌的母种培养，将里氏木霉菌丝块接入到PDA培养基上，25℃黑暗培养直至菌丝长满斜面，备用；

B、制作一级液体菌种：

（1）配置培养液；所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯10-15，红糖1-1.5，葡萄糖1-1.5，麦麸3-4，蛋白胨1-2，磷酸二氢钾1-2，硫酸镁1-1.5，琼脂1，清水75-80，pH值自然；再向培养液中加入维生素B1；

（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1-2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得丁酸梭菌活化扩繁液10-50ml；混匀菌种，然后培养1-2.5天，得一级液体菌种；

C、制作二级液体菌种：

（1）将9-11重量份的土豆加90-100重量份的水煮至酥而不烂后加入3.4-3.8重量份的大片麦麸，用6-8层纱布过滤后，向滤液中加入2.5-3重量份的辅料和0.025-0.03体积份的消泡剂，作为培养料；

（2）将350-370体积份的培养料注入培养罐内，124℃灭菌35分钟后，降温至30℃以下；将0.8-1.2体积份的一级液体菌种在无菌条件下接入到培养罐内；培养72-96小时，培养温度25℃，空气流量1.2m³/h以上；培养结束后得二级液体菌种，即为复合液体益生菌剂；

所述重量份的单位为g或kg，对应的体积份单位为mL或L。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤A中，所述丁酸梭菌经活化扩繁后的活菌数量不低于50亿UFC/mL。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯10，红糖1.5，葡萄糖1，麦麸3，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，硫酸镁1，琼脂1，清水75-80。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，维生素B1的含量为4mg/L。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（2）中，菌种混匀后，摇床振荡培养，振荡频率为180转/分钟，摇床温度控制在24-26℃。