[发明专利]一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法

权利要求书

1.一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的引物序列，其特征在于，包括正向引物和反向引物，碱基序列为：

正向引物：CACCGGAAACATCGCTGCA；

反向引物：AAGTTCCGCCGCAAGGCT。

2.一种利用权利要求1所述的目的基因引物序列检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法，其特征在于，包括：

(1)提取目标大气环境样品中的DNA，以此提取的DNA为模板，运用权利要求1中的正向引物和反向引物进行PCR定量扩增，并记录得到PCR产物的循环数；

(2)将步骤(1)中PCR定量扩增获得的循环数，根据定量PCR测定目的基因sulI质粒标准品的标准曲线，计算得到目标大气环境样品中磺胺类耐药基因sulI的含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述定量PCR的反应体系为25μL：12.5μL浓度为1×的Green qPCR SuperMix溶液，0.5μL浓度为1×的Passive Reference Dye溶液，0.5μL 0.2μM的正向引物，0.5μL 0.2μM的反向引物，10μL ddH₂0，1.0μL Template DNA。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述目的基因sulI质粒标准品的标准曲线的绘制方法如下：

a)目的基因sulI质粒标准品的制备：通过权利要求1设计的正向引物和反向引物，PCR扩增获得目的基因PCR产物，然后利用胶回收试剂盒回收获得纯的目的DNA片段；将纯化后的DNA运用载体连接后转化进E.coli DH5α感受态细胞，将培养好的感受态细胞涂抹在含IPTG、X-gal和青霉素的LB固体培养平板上；通过蓝白斑筛选法挑取白色重组菌斑上的阳性克隆子，用含青霉素的LB培养液扩大培养；用质粒提取试剂盒提取菌液中的质粒，切胶后送样测序检测插入基因片断序列；符合要求的质粒作为标准品；

b)运用10倍梯度稀释法作出所述标准品的目的基因的标准曲线。