[发明专利]超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法

说明书

本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法，包括：分别采用乙腈溶解安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼配制标准曲线工作液，采用甲醇溶解地西泮配制成内标物工作液；将0‑5μL标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至50μL，涡旋制成标准曲线血浆样品，加入内标物工作液，涡旋，离心，取上清液，进行UPLC‑MS/MS定量分析，绘制标准曲线；精密吸取50μL的待测血浆，样本前处理方法同上，按照当批次的标准曲线测定安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼浓度。本发明同时测定多种抗肿瘤分子靶向药物的血药浓度，灵敏度高、专属性强、快速、重现性好，适合用于临床高通量、同时检测和监测多种抗肿瘤分子靶向药物。

技术领域

本发明涉及检测药物浓度的方法。更具体地说，本发明涉及一种超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法。

背景技术

安罗替尼(anlotinib)是中国原研创新药物之一，是一种新型小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂，能有效抑制VEGFR、PDGFR、FGFR、c-Kit等激酶，具有抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤生长的双重功效，并于2018年5月获得国家药品监督管理局批准上市。色瑞替尼(Ceritinib)是一种新型的强效选择性小分子ATP竞争性ALK受体酪氨酸激酶抑制剂，于2014年4月被FDA批准用于治疗ALK阳性或克唑替尼耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)，2015年美国国家综合癌症网络(NCCN)指南关于NSCLC的治疗策略中将色瑞替尼作为晚期NSCLC克唑替尼一线治疗进展后的治疗药物。依鲁替尼(Ibrutinib)是一种用于抑制布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)功能的靶向药物，能够与BTK活性中心的半胱氨酸残基共价结合，从而抑制B细胞的活动，对B细胞淋巴瘤疗效显著，尤其是对于难控制易复发的多种晚期淋巴瘤患者。

近年来，以酪氨酸激酶抑制剂(TKI)为代表的分子靶向药已经将肿瘤的治疗带领至新的靶向时代，从2001年FDA批准的首个TKI药物伊马替尼发展至今，基于不同作用机制、不同靶点的靶向药物层出不穷。随着临床分子靶向药物应用的逐渐深入，提高治疗疗效的同时也暴露出诸多劣势，其中由于特异位点突变、信号通路旁路激活以及转运体过表达引起的获得性耐药是临床应用中亟待解决的问题，而克服获得性耐药的一种有效方法是联合应用不同作用机制的TKI逆转外排转运体介导的耐药。已有学者正在开展不同TKI药物联合应用的临床研究。此外，分子靶向药物药代动力学特征个体间差异较大，这些差异进一步导致药物疗效及毒性不同。通过定期监测患者的血药浓度有助于预测疗效及可能的不良反应，显著提高患者的获益风险比、从而实现个体化精准用药。双原发或多原发癌是同一位患者同时发生两个或多个原发病灶，如肺癌伴发乳腺癌、肺癌伴发淋巴瘤等，其发病频率约为2-17％，显著危害人类的健康。安罗替尼和色瑞替尼均对肺癌具有显著的疗效，而依鲁替尼作为血液肿瘤的靶向药物，因此，建立一种准确、快速、高通量的方法用于同时测定两种或两种以上分子靶向药物是非常必要和需要的。

现有技术中用于测量生物基质中安罗替尼、色瑞替尼和依鲁替尼的方法大多检测的是上述单药，例如采用液液萃取法前处理大鼠血浆后采用LC-MS/MS测定安罗替尼药物浓度，分析时间长、线性范围窄、样本前处理不便利；采用蛋白沉淀-盐析辅助液液萃取法测定人血浆中色瑞替尼浓度，定量下限高，样本体积大；采用液液萃取法前处理大鼠血浆后利用LC-MS/MS法同时测定依鲁替尼及代谢物的浓度，提取回收率低且费时费力、分析时间长。目前，尚无同时测定上述三种靶向药物的方法。采用高效液相色谱串联质谱方法进行多种分子靶向药物的测定，并不是简单调试仪器参数就能实现，如何保证待测物之间不互相干扰是定量分析的难题，这也是为什么目前没有采用色谱串联质谱针对多种抗肿瘤分子靶向药物同时检测的技术公开的原因。为满足临床前和临床高通量检测的要求，本领域急需无特殊的设备要求、高通量、样品需求少、方便、快速、多功能的测定安罗替尼、色瑞替尼和依鲁替尼浓度的测定方法。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。