[发明专利]一株产木聚糖酶黑曲霉基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一株产木聚糖酶的黑曲霉基因工程菌，其特征在于，该菌株是Msb2基因失活的黑曲霉菌SJ1，所述的黑曲霉菌SJ1已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2019年02月28日，保藏编号为CCTCC NO:M2019115；

所述Msb2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Msb2基因失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述产木聚糖酶的黑曲霉基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）提取黑曲霉SJ1基因组；

（2）构建基因敲除片段△Msb2，所述基因敲除片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

（3）制备黑曲霉原生质体；

（4）将基因敲除片段导入原生质体中进行同源重组，得到Msb2基因失活黑曲霉基因工程菌。

3.权利要求1所述产木聚糖酶的黑曲霉菌基因工程菌在制备木聚糖酶中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：以产木聚糖的黑曲霉基因工程菌为发酵菌剂，多孔纤维材料为固定化载体，发酵制备木聚糖酶，所述的固定化载体为聚氨酯。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的固定化载体通过如下方法进行预处理：

将固定化载体用0.5~2M的NaOH浸泡30min~2h，用水冲洗至pH为中性，在0.5~2M HCl中浸泡30min~2h，用水冲洗至pH为中性，烘干，得到经过预处理的固定化载体。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的发酵，其发酵条件如下：

发酵培养基: 木聚糖 10~70g/L、NaNO₃ 2~6 g/L、KH₂PO₄ 0.3~2 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.1~0.8 g/L、吐温-80 0.1~0.8 g/L，以麸皮浸出液配制；

所述的麸皮浸出液按照如下方法制备：称取15~60g/L的麸皮，加入800mL水，煮沸30min~2h后，过滤得滤液，用水再定容至1L；

发酵条件如下：28~32°C、150~300 r/min培养3~6d。