[发明专利]采用硫酸铵及CTAB沉淀结合大孔树脂精制凉粉草多糖的方法

说明书

本发明涉及植物有效成分精制加工处理方法领域，具体涉及一种通过硫酸铵及CTAB沉淀结合D301大孔树脂精制凉粉草多糖的方法。将凉粉草经过预处理和提取后得到的粗多糖，用硫酸铵及CTAB沉淀结合D301大孔树脂处理的方法以达到多糖精制的目的。采用此方法处理凉粉草多糖后，可以大大降低蛋白质和小分子杂质的残留，提高产物纯度，获得较高的多糖保留率、脱色率、蛋白脱除率和得率，同时还能较好地保留多糖的生物活性。本发明所提供的优化条件成本低、操作简单、效果好，对凉粉草多糖破坏小，适于工业化生产。

技术领域

本发明属于植物有效成分精制加工处理方法领域，具体是涉及利用硫酸铵及CTAB沉淀结合D301大孔树脂精制凉粉草多糖的方法。

背景技术

凉粉草又名仙草，是一种可食用和药用的一年生草本植物。在中国，它已被用作重要的医药和食用植物资源，通常用作草药茶和果酱型甜点和食用凝胶生产中的食品成分。它具有很多生物活性包括抗氧化，保护中暑，保肝抗高血压和降血糖等作用。多糖是凉粉草的主要成分之一，有研究表明，凉粉草多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸组成。凉粉草多糖能同其他食用胶进行复配，具有功能互补、协同增效的作用，借此可以开发有增稠、胶凝、充当膳食纤维、乳化稳定、悬浮分散等许多功能的一系列食品添加剂，使其可以更经济、有效地应用于食品加工领域并发挥重要的作用。同时，凉粉草多糖具有多种生物活性，包括抗肿瘤，抗氧化，抗病毒，降血糖，免疫调节等功效。可用于制作具有保健功能的饮料和食品，也可作为药物的潜在补充剂。

近年来，凉粉草多糖的提取和分离纯化已受到许多科研人员的关注。但从凉粉草中提取出的凉粉草多糖中蛋白质含量较高，且呈深褐色，这不但影响多糖作为食品添加剂或者功能性食品基料的外观，而且对后续的多糖的纯化产生很大的影响，所以对于凉粉草多糖的精制十分必要。传统的多糖脱蛋白的方法以Sevage法为主，方法操作繁琐，效率低，采用的有机溶剂有毒并且影响多糖的生物活性；活性炭去除多糖色素的效果较好，但后期的活性炭粉末不易去除，因此需要继续探索一种新的多糖精制方法使其发挥最大利用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种精制凉粉草多糖的方法，本发明的核心技术是：应用硫酸铵及CTAB沉淀和阴离子交换吸附树脂替代传统的Sevage法、活性炭法去除凉粉草多糖的蛋白、色素和小分子杂质，适合规模化产业化制备凉粉草精制多糖。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

采用硫酸铵及CTAB沉淀结合大孔树脂精制凉粉草多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：A.原料预处理；B.热水浸提制备粗多糖；C.硫酸铵沉淀；D.CTAB沉淀；E.D301大孔吸附树脂处理；F.透析去除小分子；G.真空冷冻干燥，获得精制凉粉草多糖。

进一步地，所述的步骤如下：

A、原料预处理：凉粉草粉碎后用8-10倍体积的60-95％乙醇浸泡16-24h，残渣阴凉处风干；

B、热水浸提制备粗多糖：预处理后的凉粉草中加入10-20倍体积的水溶液，沸水提取1-3h，上清液用120目纱布过滤，滤渣重复提取1-3次，合并滤液，浓缩，离心，得到凉粉草粗多糖溶液；

C、硫酸铵沉淀：凉粉草粗多糖溶液用饱和的硫酸铵溶液在4℃下沉淀8-12h，粗多糖与硫酸铵溶液的体积比为1∶1；离心除去沉淀，得到凉粉草多糖溶液；

D、CTAB沉淀：凉粉草多糖溶液中加入等量的CTAB溶液，过夜沉淀8-12h，离心收集沉淀，沉淀用10％的NaCl溶解后，加入3-5倍体积的95％乙醇，离心收集沉淀；蒸馏水溶解后得到进一步纯化的凉粉草多糖；

E、D301大孔树脂预处理：将上步所得到的凉粉草多糖溶液缓慢的通过预处理好的D301大孔树脂柱，然后用0.1-0.3M的NaCl溶液洗脱，流速控制在1.5-2.2mL/min收集洗脱液；