[发明专利]一种多抗原仿生流感疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种多抗原仿生流感疫苗，其特征在于，所述多抗原仿生流感疫苗包括病毒样颗粒载体蛋白、表面抗原和内腔抗原，所述表面抗原分布于病毒样颗粒载体蛋白的表面，内腔抗原分布于病毒样颗粒的内部空腔；

所述表面抗原为HA抗原和M2e抗原的组合；

所述内腔抗原为NP抗原；

所述表面抗原通过基因融合表达或化学偶联法分布于病毒样颗粒载体蛋白表面；

其制备方法包括以下步骤：将表面抗原装载到病毒样颗粒载体蛋白的表面，将内腔抗原装载到病毒样颗粒的内部空腔中，得多抗原仿生流感疫苗；

所述内腔抗原装载方法包括加热法；

所述病毒样颗粒载体蛋白为全长乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的多抗原仿生流感疫苗，其特征在于，所述化学偶联法的化学交联剂包括琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(Sulfo-SMCC)、琥珀酰亚胺基-马来酰亚胺多聚乙二醇(NHS-PEG_n-Mal)、N-ε-马来酰亚胺己酸琥珀酰亚胺酯(EMCS)、N-ε-马来酰亚胺己酸磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-EMCS)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)、羧基-氨基多聚乙二醇(COOH-PEG_n-NH₂)、双琥珀酰亚胺辛二酸酯(DSS)、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯(Sulfo-DSS)、双磺基琥珀酰亚胺酯多聚乙二醇(NHS-PEG-NHS)等中的任一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求2所述的多抗原仿生流感疫苗，其特征在于，所述化学偶联法的化学交联剂为Sulfo-SMCC、NHS-PEG_n-Mal、EDC或Sulfo-NHS中的任一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求3所述的多抗原仿生流感疫苗，其特征在于，所述化学偶联法的化学交联剂为EDC和Sulfo-NHS的组合。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的多抗原仿生流感疫苗，其特征在于，所述加热法具体包括如下步骤：

(1’)将待装载的内腔抗原与病毒样颗粒或表面分布有表面抗原的病毒样颗粒载体蛋白混合，加热；

(2’)去除未被装载的内腔抗原，纯化回收，得多抗原仿生流感疫苗；

步骤(1’)所述加热的温度为37-65℃；

步骤(1’)所述加热的时间为45-120min；

步骤(2’)所述去除未被装载的内腔抗原的方法包括超滤、凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析或超速离心中的任一种或至少两种的组合。

6.一种制备如权利要求1-5中任一项所述的多抗原仿生流感疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将第一种表面抗原基因融合表达至病毒样颗粒载体蛋白表面，得病毒样颗粒；

(2)将内腔抗原装载到步骤(1)所得病毒样颗粒的内部空腔中；

(3)在步骤(2)所得病毒样颗粒表面化学偶联修饰第二种表面抗原，得多抗原仿生流感疫苗。

7.一种制备如权利要求1-5中任一项所述的多抗原仿生流感疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将两种表面抗原基因均融合表达至病毒样颗粒载体蛋白表面，得到病毒样颗粒；

(2)将内腔抗原装载到步骤(1)所得病毒样颗粒的内部空腔中，得多抗原仿生流感疫苗。

8.一种制备如权利要求1-5中任一项所述的多抗原仿生流感疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将内腔抗原装载到病毒样颗粒的内部空腔中；

(2)将第一种表面抗原基因通过化学偶联修饰负载至步骤(1)所得病毒样颗粒载体蛋白表面；

(3)在步骤(2)所得病毒样颗粒表面化学偶联修饰第二种表面抗原，得多抗原仿生流感疫苗。

9.一种如权利要求1-5中任一项所述的多抗原仿生流感疫苗用于制备预防流感的药物中的应用。