[发明专利]一种通用型核酸提取试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种提取核酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）第一试剂和蛋白酶K裂解样本，加入磁珠吸附裂解释放的核酸；（2）第二试剂和第三试剂依次洗涤吸附核酸的所述磁珠；（3）第四试剂洗脱所述磁珠吸附的核酸；

所述第一试剂为包括2.0-5.0 M胍盐、2.0-5.0 mM金属离子络合剂、100.0-300.0 mM非离子表面活性剂和1.0-5.0 M异丙醇的水溶液；

所述第二试剂为包括20.0-40.0 mM柠檬酸和10.0-30.0 mM金属离子络合剂的水溶液，pH值为3.5-4.5；

所述第三试剂为包括2.0-10.0 mM柠檬酸和1.0-5.0 mM金属离子络合剂的水溶液，pH值为3.5-4.5；

所述第四试剂为包括5.0-30.0 mM三羟甲基氨基甲烷和1.0-15.0 mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶液；

所述胍盐为异硫氰酸胍，所述非离子表面活性剂为曲拉通X-100，所述第一试剂、第二试剂和第三试剂中的金属离子络合剂为柠檬酸钠；

所述第二试剂和所述第三试剂中还包括Proclin95；

步骤（1）所述样本、第一试剂、蛋白酶K和磁珠的体积比为1：（0.5-1.2）：（0.01-0.05）：（0.01-0.05）；

步骤（2）所述磁珠与第二试剂的体积比为1：（10-100）；

步骤（3）所述磁珠与第四试剂的体积比为1：（3-10）；

步骤（1）所述裂解包括：将样品与各试剂混合，振荡15-45s，使样本充分降解；所述吸附包括：加入磁珠后，振荡15-45s，之后吸附4-8min；

步骤（2）所述洗涤包括：加入第二试剂或第三试剂，振荡15-45s；之后吸附15-45s；

步骤（3）所述洗脱包括：加入第四试剂，振荡15-45s，之后弃磁珠，即得核酸提取液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一试剂中，所述胍盐的浓度为3.0-4.0 M；所述金属离子络合剂的浓度为2.0-3.0 mM；所述非离子表面活性剂的浓度为130-200 mM；所述异丙醇的浓度为3.0-4.0 M；

在所述第二试剂中，所述柠檬酸的浓度为25.0-35.0 mM；所述金属离子络合剂的浓度为15.0-25.0 mM；所述第二试剂的pH值为3.7-4.2；

在所述第三试剂中，所述柠檬酸的浓度为3.0-7.0 mM；所述金属离子络合剂的浓度为2.5-4.0mM；所述第二试剂的pH值为3.7-4.2；

在所述第四试剂中，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为10-20 mM，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的浓度为1.0-10.0 mM。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一试剂中，所述胍盐的浓度为3.5M；所述金属离子络合剂的浓度为2.5 mM；所述非离子表面活性剂的浓度为166.1 mM；所述异丙醇的浓度为3.3 M。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第二试剂中，所述柠檬酸的浓度为31.1 mM；所述金属离子络合剂的浓度为19.0 mM；所述第二试剂的pH值为4.0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第三试剂中，所述柠檬酸的浓度为5.7 mM；所述金属离子络合剂的浓度为3.7 M；所述第二试剂的pH值为4.0。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Proclin950的体积浓度为0.05~0.2 %（v/v）；所述第四试剂中还包括Carrier RNA，所述Carrier RNA的浓度为0.2-2.0μg/μl。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述Proclin950的体积浓度为0.1%（v/v）；所述Carrier RNA的浓度为1μg/μl。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁珠为硅基磁珠，粒径大小为1-1.5μm。