[发明专利]一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的引物、探针和试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的引物、探针和试剂盒，所述引物包括用于扩增SENP2基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2。所述探针包括用于检测SENP2基因的探针P1和用于检测对照基因GAPDH的探针P2。所述试剂盒包括上述所述的引物和上述所述的探针。本发明的引物和探针特异性好，检测灵敏精确。本发明的试剂盒使用FAM和VIC双通道可对SENP2 mRNA的表达进行准确的定量分析，具有快速、简便、灵敏度高等检测优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的引物、探针和试剂盒。

背景技术

病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是由病毒引起的心肌局限性或弥漫性的急性或慢性炎症病变。近年来病毒性心肌炎在我国的发病呈上升趋势，已成为儿童和青少年猝死的主要原因之一。部分患者呈自限性病程，重者可出现心力衰竭、心源性休克和猝死，部分患者可演变为扩张型心肌病，致死率高达50%。病毒性心肌炎已成为我国亟需解决的重大公共卫生问题。目前对病毒性心肌炎的临床检测主要集中在心肌损伤后释放在血清中的心肌酶CK和CK-MB的改变，以及心电图的动态监测。而临床发现，心肌酶检测往往缺乏与病毒性心肌炎的正相关性，有时不能反映心肌炎患者的实际情况。因此，寻找有效的病毒性心肌炎的识别标志物，是降低该病死亡率的关键。SENP2是半胱氨酸蛋白酶家族成员，由589个氨基酸残基构成，是蛋白质SUMO化修饰的主要蛋白酶。我们前期研究发现，SENP2条件性敲除小鼠出现胚胎心脏发育的缺陷，研究结果表明SENP2对心肌细胞的发育具有重要作用。肠道病毒属的柯萨奇病毒A组、柯萨奇病毒B组、艾可病毒、脊髓灰质炎病毒等为常见的致心肌炎病毒，其中柯萨奇B组3型（CVB3）是最主要的病毒。我们研究发现，经CVB3感染导致的病毒性心肌炎小鼠中，心脏中SENP2的mRNA水平和蛋白水平都显著升高（实验结果如图4A、B所示）。同时，在心肌炎病理切片HE染色和免疫组化结果显示，心脏出现大量炎症细胞浸润，而且在炎症细胞中出现大量SENP2蛋白的高表达（实验结果如图5A、B所示）。因此，SENP2在病毒性心肌炎中与炎症程度呈正相关，可以作为病毒性心肌炎识别诊断的分子标志物。本发明将使用荧光定量PCR技术，在mRNA水平检测SENP2表达情况，为病毒性心肌炎的诊断提供准确、快速、高效、敏感的检测方法。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的PCR引物，该引物特异性好，检测灵敏精确。

本发明的另一个目的在于提供一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的PCR探针，该探针特异性好，检测灵敏精确。

本发明的还一个目的在于提供一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的PCR试剂盒，该试剂盒使用FAM和VIC双通道可对SENP2 mRNA的表达进行准确的定量分析，具有快速、简便、灵敏度高等检测优点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的PCR引物，所述引物包括用于扩增SENP2基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4条引物的核苷酸序列分别为：

F1：5’-GGACACTGATGAAATACCAG-3'

R1：5’-CCGTGTTCCATTACAAGCAG-3'

F2：5’-CCTGCCAAGTATGATGACATCAAGA-3'

R2：5’-GTAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3'。

本发明的另一个目的通过下述技术方案实现：一种用于定量检测SENP2 mRNA水平的PCR探针，所述探针包括用于检测SENP2基因的探针P1和用于检测对照基因GAPDH的探针P2，所述探针的核苷酸序列分别为：