[发明专利]核磁-光学双模态成像双锥形DNA纳米探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.核磁-光学双模态成像双锥形DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、将单链DNA的5’端修饰氨基，3’端修饰荧光分子；

B、修饰后的单链DNA与DOTA-NCS反应生成DNA-DOTA；

C、DNA-DOTA与可溶性Gd盐发生络合反应，得到螯合Gd的DNA-DOTA；

D、将15条短序列单链DNA与9条所述螯合Gd的DNA-DOTA杂交得到双锥形纳米DNA；

E、将双锥形纳米DNA与聚乙二醇-聚赖氨酸孵育，得到表面修饰聚乙二醇-聚赖氨酸的双锥形纳米DNA；

F、将表面修饰聚乙二醇-聚赖氨酸的双锥形纳米DNA与EGFR核酸适配体混合，组装得到核磁-光学双模态成像双锥形DNA纳米探针；

其中，步骤A中所述单链DNA的核苷酸序列为：5′-TTTTCGCATGTGCTT-3′；

步骤D中所述15条短序列单链DNA的核苷酸序列分别为：

1)5′-CCGCCGGCAGCCGGCAAGTAAGAGTTTGCCTGGAGCCTGCTAAGCACATGCGA-3′

2)5′-CGTGCATTTCGTCTACACAATCCTAGTCTGCAAGCACATGCGA-3′

3)5′-CTGCCACACACTGGATTTACACAAAGTATGTGGG-3′

4)5′-TTGTGTAGACGAAATGCACGAGCAGGCTCCTGGACTGTTGTTTCTGAAGCACATGCGA-3′

5)5′-AGCCTAGTCCGGACCTTGTAAGACATTCCGCCGGTAAGGCTCACGGACAAAGTATGTGGG-3′

6)5′-GGTCCGGACTAGGCTCAGAAACAACAGTCCTGCCATTGACCAAGCACATGCGA-3′

7)5′-TTCACTGGCGGCGGTCGCCATGGATCCAGCGAAGCACATGCGA-3′

8)5′-CACTTCACCAGGAGGCCTGGACAAAGTATGTGGG-3′

9)5′-GGCAAACTCTTACTTGCCGGAAGCACATGCGA-3′

10)5′-CTGCCGGCGGTTGAAACCGACGGTACGCTTTAAGCACATGCGA-3′

11)5′-GAATATGAATTTGGCGACCGCCGCCAGTGAAGGTCAATGGCACAAAGTATGTGGG-3′

12)5′-GGCAGAGCGTTTGTGGAAACCATTAGGTTTTCCGTGAGCCTTACCGAAGCACATGCGA-3′

13)5′-GCGGAATGTCTTACATCCAGGCCTCCTGGTGAAGTGCGCTGGATCCACAAAGTATGTGGG-3′

14)5′-GTAAATCCAGTGTGTGGCAGGCAGACTAGGTAAACCTAATGGTTTCAAGCACATGCGA-3′

15)5′-CACAAACGCTCTGCCTATTCATATTCAAAGCGTACCGTCGGTTTCA-3′

步骤F中所述EGFR核酸适配体的核苷酸序列为：5′-GCCUUAGUAACGUGCUUUGAUGUCGAUUCGACAGGAGGCCCCACAUACUUUGU-3′。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中所述荧光分子选自Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D中15条短序列单链DNA中的序列7)修饰有荧光分子Dylight 800或Cy5.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤F中所述聚乙二醇-聚赖氨酸为PEG_5K-K₁₀；和/或

所述核酸适配体的核苷酸2’位为氟代。