[发明专利]KCP基因在宫颈癌紫杉醇敏感性检测中的应用

说明书

本发明涉及一种KCP基因在制备宫颈癌紫杉醇治疗敏感性检测产品中的应用，所述检测产品为检测试剂或检测试剂盒，检测试剂包括KCP基因序列完整性检测试剂和/或KCP基因表达产物检测试剂。所述检测产品通过检测KCP基因的序列完整性或者KCP基因的表达产物来评估受试宫颈癌患者对紫杉醇药物化疗的敏感性，提供了宫颈癌治疗新靶点，也有助于预先评估宫颈癌患者对于紫杉醇化疗的效果。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及KCP基因的应用。

背景技术

宫颈癌是危害全球女性健康的第四位常见恶性肿瘤。据2012年统计，全球每年宫颈癌新发病例53万，新增死亡病例27万。我国是新发病例和死亡病例最多的国家，每年新发病例达13.15万，新增死亡人数约5.3万，占我国女性恶性肿瘤死亡人数的18.4％。在不发达国家宫颈癌5年生存率不高50％，尤其是Ⅲ-Ⅳ期，其生存率仅为5％-15％，宫颈癌严重威胁女性生命。虽然多年来拥有完善的宫颈癌筛查体系，可以早发现，早治疗。但是，基于我国国情，直至目前近一半宫颈癌患者就诊时已为中晚期，并有年轻化趋势。

紫杉醇(Paclitaxel)为基础一线化疗应用于所有中晚期宫颈癌患者，对紫杉醇不敏感的宫颈癌患者，会导致五年生存率降低20％-30％，紫杉醇作为一线药物治疗中晚期宫颈鳞癌患者敏感率为57.7％-80％，腺癌81％；而作为二线药物或者单药化疗药物，其总敏感率为20％-40％。美国和日本研究报道，对于局部晚期宫颈癌患者，20％患者对紫杉醇为基础新辅助化疗不敏感而导致治疗失败。

目前尚未发现特异性评估紫杉醇敏感性的标志物，若对紫杉醇不敏感宫颈癌患者进行试验性化疗，增加患者经济费用和化疗副反应，甚至导致疾病进展。因此，寻找评估紫杉醇是否敏感特异标志物，筛查出哪些患者会在紫杉醇为基础化疗中获益，哪些会导致耐药，对改善患者预后及延长患者生命尤为重要。

发明内容

本发明通过全基因组CRISPR/Cas9-Pool文库筛选技术在宫颈癌SiHa细胞中筛选出紫杉醇的潜在增敏基因，通过混合sgRNA靶点进行增殖抑制效应实验与化疗敏感性协同系数统计。高内涵筛选方法找到了7个潜在的增敏基因，进一步通过单靶点验证实验，发现Kielin/chordin样蛋白(Kielin/chordin-like protein,KCP)基因敲除后能够实现紫杉醇的增敏效应，KCP单靶点(05002-1)增敏倍数最高。通过功能试验证明，敲除KCP基因增加SiHa细胞对紫杉醇敏感性，主要表现为抑制细胞增殖和克隆。

根据本发明，提供一种宫颈癌紫杉醇治疗敏感性标志物，所述标志物为KCP基因，KCP基因序列如SEQ ID NO:1所示，KCP基因作为标志物用于评价宫颈癌患者对紫杉醇的药物敏感性。

根据本发明，提供一种宫颈癌紫杉醇治疗敏感性标志物的筛选方法，该方法包括以下步骤：

(1)全基因组CRISPR/Cas9敲除技术筛选SiHa细胞中紫杉醇化疗增敏基因，选择倍数变化FC、贝叶斯因子BF满足以下筛选条件的基因作为候选基因：

在药物组中FC_Paclitaxel≤-2，在对照组中|FC_DMSO|2；并且

在药物组中BF_Paclitaxel2，在对照组中BF_DMSO0；

(2)高内涵筛选单靶点敲除后增加紫杉醇化疗敏感性基因，针对上述步骤(1)筛选出的候选基因，每个基因6个靶点，选择在4ng/mL紫杉醇作用下增敏倍数大于1.5的sgRNA靶点为阳性靶点；

(3)针对上述步骤(2)筛选出的基因靶点，通过细胞毒实验MTT法检测紫杉醇给药后的增殖抑制率、细胞克隆能力和细胞凋亡率，满足以下筛选条件中的任意两者或两者以上的即为宫颈癌紫杉醇敏感性相关基因靶点：