[发明专利]经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原及其用途有效
| 申请号： | 201910265832.9 | 申请日： | 2019-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN109929818B | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 王辰;肖飞;张俊华;许小毛;邹丽辉;李传保;王萌;苏斐 | 申请（专利权）人： | 北京医院 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12Q1/37;C12Q1/26 |
| 代理公司： | 北京律智知识产权代理有限公司 11438 | 代理人： | 于宝庆;李华 |
| 地址： | 100730*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 修饰 苯丙氨酸 氧化酶 及其 用途 | ||
1.一种经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，其特征在于：所述修饰是在苯丙氨酸氧化酶酶原序列中的前导序列与α亚基间以及α亚基与β亚基间引入蛋白酶的特异性识别位点序列，所述苯丙氨酸氧化酶酶原来源于Pseudomonas Sp.P-501。
2.如权利要求1所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，所述蛋白酶选自：凝血级联蛋白酶；纤溶酶；含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶；补体途径蛋白酶；MMP家族蛋白酶；NisP酶。
3.如权利要求2所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，其中所述凝血级联蛋白酶为凝血因子IIa、Va、VIIa、VIIIa、IXa、Xa、XIa或XIIa；所述含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶为Caspase-1、Caspase-2、Caspase-3、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-6、Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-10或Caspase-11；所述补体途径蛋白酶为因子C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9或C3/C5转换酶。
4.如权利要求1或2所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，所述蛋白酶的特异识别位点序列如SEQ ID NO:8-44、67任一所示。
5.如权利要求1-3任一项所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，所述苯丙氨酸氧化酶酶原序列如SEQ ID NO:1所示。
6.如权利要求1-3任一项所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，其序列如SEQ ID NO:2、4-7任一项所示。
7.权利要求1-3中任一项所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原用于检测样品中蛋白酶活性的用途。
8.如权利要求7所述的用途，所述样品选自体液或组织。
9.如权利要求7所述的用途，所述样品选自全血、血浆或血清。
10.一种分离的核酸，其编码权利要求1-6中的任一项所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原。
11.一种表达载体，其包含权利要求10所述的分离的核酸。
12.用权利要求11所述的表达载体转化或转染的宿主细胞。
13.一种检测样品中蛋白酶活性的试剂盒，其包括权利要求1-6任一项所述的经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原。
14.如权利要求13所述的试剂盒，所述试剂盒还包含经修饰的NisP蛋白酶酶原，其在前导肽和催化亚基之间包含酶特异性识别位点序列。
15.如权利要求14所述的试剂盒，其中所述酶特异性识别位点序列为凝血因子Xa的特异识别序列。
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