[发明专利]一种糖化血清白蛋白检测试剂盒

说明书

本发明针对现有检测血清糖化白蛋白技术存在的缺陷，目的在于提供一种血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于检测血清中糖化白蛋白含量时，使用果糖胺‑6‑激酶直接作用于样本中的糖化白蛋白。所述试剂盒由糖化白蛋白检测部分、总白蛋白检测部分组成、校准品和质控品组成，并主要包括四个检测试剂。与现有的市售试剂盒相比（酮胺氧化酶法），本发明所提供的试剂盒中的检测试剂可直接作用于血清中的糖化白蛋白，可避免使用蛋白酶所带来的一系列问题，具有成本低、准确性高、性质稳定等特点，便于广泛应用。

技术领域

本发明属体外诊断领域，具体的说是一种糖化血清白蛋白检测剂盒，用于人体血清糖化白蛋白的定量检测。

背景技术

糖化血清白蛋白是血液中白蛋白与葡萄糖发生非酶促糖化反应所产生的早期糖基化产物。通常认为糖化血清白蛋白测定可以准确反映人体2-3周的血糖控制情况，大量研究表明，其检测结果在糖尿病治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白具有优势。另外，作为糖尿病患者体内早期糖基化产物，糖化白蛋白能破坏内皮细胞功能，导致血管壁的氧化应激和炎症反应、刺激平滑肌细胞增殖和迁移，这些病理过程将导致动脉粥样硬化和糖尿病血管并发症的形成和发展。所以，糖化血清白蛋白含量这一指标在对糖尿病人的血糖控制方面具有重要指导意义。因此，糖化血清白蛋白已经成为临床上重要的血糖指标之一。

目前，临床上糖化血清白蛋白检测的常规方法为酮胺氧化酶法，检测过程依赖于酮胺氧化酶与被糖化的果糖氨基酸残基反应。然而，酮胺氧化酶难以直接作用于糖化白蛋白，所以在检测过程中需使用大量蛋白酶预先将糖化白蛋白分解为氨基酸“碎片”，再利用酮胺氧化酶高度选择地与其中果糖氨基酸反应，通过这一过程产生定量的过氧化氢，进而通过Trinder’s反应测定出糖化白蛋白含量（C_GA）。与此同时，使用溴甲酚紫测定血清白蛋白总量（C_ALB），再通过计算两次测定的比值，得到糖化血清白蛋白的百分含量（C_GA/C_ALB*100%）。

所以糖化血清白蛋白测定试剂盒通常由糖化白蛋白试剂（下称GA测定试剂）和总白蛋白试剂（下称ALB测定试剂）两部分组成(例如在专利文献CN 102565420 A及US8105800 B2所公布的方法)。在GA测定试剂中，第一试剂（R1）的主要成分为酮胺氧化酶、Trinder’s反应底物、抗干扰物质；第二试剂（R2）的主要成分为蛋白酶和Trinder’s反应底物。理想状态下，将样本与R1混合均匀，消除干扰物质后，加入R2使蛋白酶与糖化白蛋白反应，引发上述Trinder’s反应链，从而测量样本中的糖化白蛋白含量。然而实际上，蛋白酶对所有蛋白质均具有相同的反应性，也就是说，在加入R2后，蛋白酶会使反应体系中所有蛋白质同时降解，这样就会在一定程度上抑制了后续反应的进行。为保证测量结果正确，有必要在试剂盒中大量添加其他酶，如酮胺氧化酶、过氧化氢酶等，使试剂盒的成本增加。另外，蛋白酶本身亦为蛋白质，将其保存在液体试剂中，其自身也会发生降解，造成活性降低，缩短试剂盒的寿命。

在开发糖化血清白蛋白检测试剂盒的过程中，我们发现果糖胺-6-激酶可以直接与糖化白蛋白赖氨酸残基上的ε-氨基糖基反应，将其转化为果糖胺-6-磷酸，并且该反应会同时将三磷酸腺苷(ATP)转化为二磷酸腺苷(ADP)。根据这一发现，可以开发一种使用果糖胺-6-激酶为核心原料的糖化血清白蛋白试剂盒。值得注意的是，与现有的测定糖化血清白蛋白方法（酮胺氧化酶法）不同，本发明的测定过程是直接发生在糖化白蛋白的糖基上，即在测试中无需使用蛋白酶“切割”糖化白蛋白，这样就避免了测量过程中由于蛋白酶的加入而带来的成本增加及各种问题。

发明内容

本发明提供一种糖化血清白蛋白检测定剂盒，其特征在于使用果糖胺-6-激酶为核心反应物质，直接与样本中的糖化白蛋白上的糖基反应，以达到定量测定糖化血清白蛋白的目的。

所以，本发明的内容包括：